作者charlielg (chi)
看板Biotech
标题[讨论]ligation问题?
时间Thu May 7 22:45:52 2009
最近要把我的insert(约2.9kb)接入expression vector(PMal-C2X,6.6kb)中
,结果在transform之後有长出数十颗single colony,把这接single colony进行
培养并抽plasmid,之後进行double digest,发现有一组切出insert大小很相近,送
定序,定序出来结果进行比对,结果发现比对不到我的insert序列却比对出cloning
host的序列,想请问是操作过程中有污染造成的或是有其他原因?希望好心人士给点建议
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.121.155.210
1F：推 FinAPP:先确认EXPRESSION VECTOR上除了cloning site外有没有会被RE 05/08 10:59
2F：→ FinAPP:辨识的site 05/08 11:00
3F：推 FinAPP:我猜你是用vector上的primer读,如果是污染insert有进去的话 05/08 11:08
4F：→ FinAPP:应该会有两个讯号 05/08 11:08
5F：→ FinAPP:所以应该是没clone成功 05/08 11:10