作者nausea (nausea)
看板Biotech
標題[求救] Western Blot 的疑問....
時間Wed May 6 22:51:16 2009
請參考圖片
http://www.wretch.cc/album/album.php?id=kattekeneden&book=1
三張照片是同一片menbrane 染不同抗體得到的結果
每一張右邊sample-1.2.3 各和 左邊sample-1.2.3 為同Sample
為什麼會出現在不同抗體有的band會出現不完整
圖1-1 右2和左2 跑出結果不同
圖2-1 右3和左3 結果不同 （明明都是同一管Sample Q_Q）
但 圖4-1 看起來就沒有band 不均勻的問題!!
這種狀況的原因有可能是
1. 做膠的問題
2. protein extract 的問題
3. 跑膠的問題
4. 還是其他方面呢?
麻煩 Western 達人能夠幫忙>"<
感激不盡....
Ps. load sample時，沒有pipeting 只有用手指彈彈eppendorf
這樣會造成 上面的問題嗎？ 謝謝...
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.161.214.145
1F：推 raxjimmy:你轉膜前有用transfer buffer先泡膠嗎?? 05/07 14:49
2F：→ justwhite:我也是邊邊band不完整耶 學長是說邊邊不要load sample 05/07 23:39
3F：→ justwhite:樓上 為啥要用transfer buffer先泡膠? 05/07 23:40
4F：推 littlelizard:似乎可以防止小分子轉過頭 PVDF泡一下甲醇也不錯 05/08 00:01
5F：→ nausea:membrane 有先泡過5-10分鐘... 05/08 11:05
6F：推 raxjimmy:有時候sample太濃轉膜的時候solvent未必可以均勻滲透膠的 05/08 11:56
7F：→ raxjimmy:band 所以才會出現有跑的不均勻的斷層 這種現象在跑比稀 05/08 11:57
8F：→ raxjimmy:的sample中就比較沒看過 所以這只是我的推測XD 05/08 11:58
9F：→ raxjimmy:當然也有可能是membrane的問題 05/08 11:59
10F：→ raxjimmy:PVDF我第一次做沒泡甲醇 完全失敗..囧 被老闆痛罵 05/08 12:00
11F：推 phyton:其實我傾向 呈色的問題，因為比較分子量在 40-50 kDa 間 05/08 16:56
12F：→ phyton:結果不太一樣 所以 Transfer 可能沒問題 05/08 16:57
13F：→ phyton:建議以後加多一點呈色染劑 (ECL或其他)並且注意分佈均勻 05/08 16:57
15F：→ sneak: m 01/03 16:54