作者nausea (nausea)
看板Biotech
标题[求救] Western Blot 的疑问....
时间Wed May 6 22:51:16 2009
请参考图片
http://www.wretch.cc/album/album.php?id=kattekeneden&book=1
三张照片是同一片menbrane 染不同抗体得到的结果
每一张右边sample-1.2.3 各和 左边sample-1.2.3 为同Sample
为什麽会出现在不同抗体有的band会出现不完整
图1-1 右2和左2 跑出结果不同
图2-1 右3和左3 结果不同 （明明都是同一管Sample Q_Q）
但 图4-1 看起来就没有band 不均匀的问题!!
这种状况的原因有可能是
1. 做胶的问题
2. protein extract 的问题
3. 跑胶的问题
4. 还是其他方面呢?
麻烦 Western 达人能够帮忙>"<
感激不尽....
Ps. load sample时，没有pipeting 只有用手指弹弹eppendorf
这样会造成 上面的问题吗？ 谢谢...
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.161.214.145
1F：推 raxjimmy:你转膜前有用transfer buffer先泡胶吗?? 05/07 14:49
2F：→ justwhite:我也是边边band不完整耶 学长是说边边不要load sample 05/07 23:39
3F：→ justwhite:楼上 为啥要用transfer buffer先泡胶? 05/07 23:40
4F：推 littlelizard:似乎可以防止小分子转过头 PVDF泡一下甲醇也不错 05/08 00:01
5F：→ nausea:membrane 有先泡过5-10分钟... 05/08 11:05
6F：推 raxjimmy:有时候sample太浓转膜的时候solvent未必可以均匀渗透胶的 05/08 11:56
7F：→ raxjimmy:band 所以才会出现有跑的不均匀的断层 这种现象在跑比稀 05/08 11:57
8F：→ raxjimmy:的sample中就比较没看过 所以这只是我的推测XD 05/08 11:58
9F：→ raxjimmy:当然也有可能是membrane的问题 05/08 11:59
10F：→ raxjimmy:PVDF我第一次做没泡甲醇 完全失败..囧 被老板痛骂 05/08 12:00
11F：推 phyton:其实我倾向 呈色的问题，因为比较分子量在 40-50 kDa 间 05/08 16:56
12F：→ phyton:结果不太一样 所以 Transfer 可能没问题 05/08 16:57
13F：→ phyton:建议以後加多一点呈色染剂 (ECL或其他)并且注意分布均匀 05/08 16:57
15F：→ sneak: m 01/03 16:54