作者raxjimmy (rearrangement)
看板Biotech
標題[討論] DEPC的使用方法
時間Wed May 6 13:56:56 2009
有幸要開始抽RNA了
上次也問過大家知道直接抽total RNA就可以了
因為我們很久沒做過
所以我去別人實驗室問他們的做法
他們用具是開一套新的塑膠離心試管在RNA區專用
而玻璃器材等等就用DEPC水用噴霧噴噴擦一擦然後滅兩次菌
tip則是直接滅兩次菌
這樣會太簡陋嗎?
話說說我們的老闆嚴格多了XD
剛處理完一批東西被罵
老闆說要全部浸泡DEPC水
而且連tip也要泡
簡單的說就是要用什麼就全部都泡水
泡完水全部都用150度烘五個小時(除了會溶化的)
烘完之後再全部拿去滅菌
滅菌之後再全部拿去烘5小時
這兩個超極端的......
讓我有點不太能適應= =
所以想請問一下各位RNA專用器材都怎麼處理的
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 163.13.115.38
1F：推 blence:DEPC水只是用DEPC前處理消除水中的RNase活性,高溫滅菌後,指 05/06 14:00
2F：→ blence:能視為乾淨的水,拿實驗耗材去浸泡DEPC水,很難想像有效果 05/06 14:01
3F：→ raxjimmy:別人實驗室的配法是0.1%DEPC配成75%酒精來擦器材 05/06 14:03
4F：→ blence:不如將實驗器材浸泡雙氧水,這種做法還比較普遍 05/06 14:03
5F：→ raxjimmy:我提議了 但是老闆很堅持RNase inhibitor的這個效果 05/06 14:06
6F：→ raxjimmy:所以滅菌和烘的效果反而會比DEPC效果好嗎??? 05/06 14:08
7F：推 damyr:噴DEPC水滅菌就好了 05/06 14:24
8F：→ raxjimmy:樓上那個DEPC水是二次滅菌水+DEPC沒錯吧? 05/06 14:28
9F：推 sGoat:其實一般的高熱高壓滅菌是沒辦法去除RNase的,我以前的作法是 05/06 15:23
10F：→ sGoat:玻璃製品210度乾熱滅菌16小時,塑膠製品4%(忘了)雙氧水處理1h 05/06 15:25
11F：→ sGoat:再烘乾使用,頂多再滅菌...tip之類的因為是機器製造,所以不應 05/06 15:26
12F：→ sGoat:會有RNase存在,所以頂多滅菌...不過施主你的問題是"老闆" 05/06 15:27
13F：→ raxjimmy:這樣感覺雙氧水挺好用的 DEPC賣超貴的說= = 05/06 15:28
14F：→ sGoat:所以溝通不行的話還是照老闆的話去做吧,以免做了還被懷疑數 05/06 15:28
15F：→ raxjimmy:只不過是去除一個酵素 買到100ml一萬多的東西來泡澡XD 05/06 15:28
16F：→ sGoat:據,我的方法是參閱molecular cloning RNA操作處理的步驟 05/06 15:29
17F：→ raxjimmy:這樣我大概知道標準程序了 感謝各位大大QQ 05/06 15:30
18F：→ sGoat:不過你要做RNA實驗的水溶液也都是要用DEPC配,所以還是買吧 05/06 15:30
19F：→ raxjimmy:有跟別人借拉XD 是因為要泡澡所以才會要買 總不能用光嘛 05/06 15:48
20F：推 ranilla:實驗不穩時，還是老闆最大 05/06 15:52
21F：推 lssunti:二種方法都先小量試過 從自已結果決定要用哪一種 05/06 19:40
22F：推 justwhite:泡DEPC水又沒用 先想想原理吧 DEPC水是水裡沒有RNase 05/07 23:37
23F：→ justwhite:不是DEPC水可以拿來去RNase 05/07 23:38
24F：→ raxjimmy:我用的有分 滅菌水+DEPC拿來噴東西的 05/08 10:43
25F：→ raxjimmy:水+DEPC在拿去滅菌的就是RNase free水 05/08 10:44
26F：→ raxjimmy:不過DEPC超噁的味道 還是雙氧水感覺健康些XD 05/08 10:45
27F：推 justwhite:DEPC會致癌 不要聞比較好 哀...老闆要逼死人嗎 05/09 13:31