作者raxjimmy (rearrangement)
看板Biotech
标题[讨论] DEPC的使用方法
时间Wed May 6 13:56:56 2009
有幸要开始抽RNA了
上次也问过大家知道直接抽total RNA就可以了
因为我们很久没做过
所以我去别人实验室问他们的做法
他们用具是开一套新的塑胶离心试管在RNA区专用
而玻璃器材等等就用DEPC水用喷雾喷喷擦一擦然後灭两次菌
tip则是直接灭两次菌
这样会太简陋吗?
话说说我们的老板严格多了XD
刚处理完一批东西被骂
老板说要全部浸泡DEPC水
而且连tip也要泡
简单的说就是要用什麽就全部都泡水
泡完水全部都用150度烘五个小时(除了会溶化的)
烘完之後再全部拿去灭菌
灭菌之後再全部拿去烘5小时
这两个超极端的......
让我有点不太能适应= =
所以想请问一下各位RNA专用器材都怎麽处理的
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.13.115.38
1F：推 blence:DEPC水只是用DEPC前处理消除水中的RNase活性,高温灭菌後,指 05/06 14:00
2F：→ blence:能视为乾净的水,拿实验耗材去浸泡DEPC水,很难想像有效果 05/06 14:01
3F：→ raxjimmy:别人实验室的配法是0.1%DEPC配成75%酒精来擦器材 05/06 14:03
4F：→ blence:不如将实验器材浸泡双氧水,这种做法还比较普遍 05/06 14:03
5F：→ raxjimmy:我提议了 但是老板很坚持RNase inhibitor的这个效果 05/06 14:06
6F：→ raxjimmy:所以灭菌和烘的效果反而会比DEPC效果好吗??? 05/06 14:08
7F：推 damyr:喷DEPC水灭菌就好了 05/06 14:24
8F：→ raxjimmy:楼上那个DEPC水是二次灭菌水+DEPC没错吧? 05/06 14:28
9F：推 sGoat:其实一般的高热高压灭菌是没办法去除RNase的,我以前的作法是 05/06 15:23
10F：→ sGoat:玻璃制品210度乾热灭菌16小时,塑胶制品4%(忘了)双氧水处理1h 05/06 15:25
11F：→ sGoat:再烘乾使用,顶多再灭菌...tip之类的因为是机器制造,所以不应 05/06 15:26
12F：→ sGoat:会有RNase存在,所以顶多灭菌...不过施主你的问题是"老板" 05/06 15:27
13F：→ raxjimmy:这样感觉双氧水挺好用的 DEPC卖超贵的说= = 05/06 15:28
14F：→ sGoat:所以沟通不行的话还是照老板的话去做吧,以免做了还被怀疑数 05/06 15:28
15F：→ raxjimmy:只不过是去除一个酵素 买到100ml一万多的东西来泡澡XD 05/06 15:28
16F：→ sGoat:据,我的方法是参阅molecular cloning RNA操作处理的步骤 05/06 15:29
17F：→ raxjimmy:这样我大概知道标准程序了 感谢各位大大QQ 05/06 15:30
18F：→ sGoat:不过你要做RNA实验的水溶液也都是要用DEPC配,所以还是买吧 05/06 15:30
19F：→ raxjimmy:有跟别人借拉XD 是因为要泡澡所以才会要买 总不能用光嘛 05/06 15:48
20F：推 ranilla:实验不稳时，还是老板最大 05/06 15:52
21F：推 lssunti:二种方法都先小量试过 从自已结果决定要用哪一种 05/06 19:40
22F：推 justwhite:泡DEPC水又没用 先想想原理吧 DEPC水是水里没有RNase 05/07 23:37
23F：→ justwhite:不是DEPC水可以拿来去RNase 05/07 23:38
24F：→ raxjimmy:我用的有分 灭菌水+DEPC拿来喷东西的 05/08 10:43
25F：→ raxjimmy:水+DEPC在拿去灭菌的就是RNase free水 05/08 10:44
26F：→ raxjimmy:不过DEPC超恶的味道 还是双氧水感觉健康些XD 05/08 10:45
27F：推 justwhite:DEPC会致癌 不要闻比较好 哀...老板要逼死人吗 05/09 13:31