作者sjacky (陳小文)
看板Biotech
標題[求救] Western Blotting的問題
時間Wed Apr 15 19:35:46 2009
工作關係，開始接觸Western
剛開始學習，目前還算順利
其中遇到一個問題
SDS-PAGE->Transfer->1st Antibody->2nd Antibody->壓片
目前完整流程大概做了9次左右
其中有兩次，壓片後，連Marker都無法顯示出來
我使用兩種Marker，一種是在SDS-PAGE上可顯示的，另一種是壓片時可在底片上顯示
其中一次，是我在壓片時，第一次有壓出來，第二次時底片不小心跟Mambrane接觸到
我在用Santa Cruz的substrate，我在把Mambrane再與substrate作用一次
結果，後面怎麼壓都是空白，連應該要顯示的Marker也沒有
另外一次，則是substrate的A、B液要混合時，比例應該是1：1
結果因為B液快用完了，所以大概比例是1：2/3
與Mambrane作用後，進行壓片，結果也是連基本要出現的Marker都沒有顯示出來
其餘之前所進行的Western都很正常
麻煩請各位幫我看看，若有不詳盡的部份，請各位提點，謝謝
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.64.22.9
1F：推 iiidns:看到聖誕老公公牌 我笑了~~~~ 04/15 20:40
2F：推 bluecsky:用santa Cruz就要多燒香拜拜... 04/15 22:18
3F：推 blence:這篇文章提到的問題跟Santa Cruz產品一點關係也沒有阿 04/15 22:34
4F：推 bluecsky:阿哩..我以為他是用santa cruz的antibody..= = 04/15 23:58
5F：推 iiidns:單純只是因為 我用過 還挺慘烈的... 04/16 08:06
6F：推 liner76:santa cruze 的抗體不好用嗎？.... 04/16 13:44
7F：推 teru88:請問你有blocking @@? 04/16 13:49
8F：推 leoblack:santa cruz好的不錯~爛的就真的爛到爆~ 04/16 14:31
9F：→ sjacky:有，transfer後 blocking一小時 04/16 21:16