作者sjacky (陈小文)
看板Biotech
标题[求救] Western Blotting的问题
时间Wed Apr 15 19:35:46 2009
工作关系，开始接触Western
刚开始学习，目前还算顺利
其中遇到一个问题
SDS-PAGE->Transfer->1st Antibody->2nd Antibody->压片
目前完整流程大概做了9次左右
其中有两次，压片後，连Marker都无法显示出来
我使用两种Marker，一种是在SDS-PAGE上可显示的，另一种是压片时可在底片上显示
其中一次，是我在压片时，第一次有压出来，第二次时底片不小心跟Mambrane接触到
我在用Santa Cruz的substrate，我在把Mambrane再与substrate作用一次
结果，後面怎麽压都是空白，连应该要显示的Marker也没有
另外一次，则是substrate的A、B液要混合时，比例应该是1：1
结果因为B液快用完了，所以大概比例是1：2/3
与Mambrane作用後，进行压片，结果也是连基本要出现的Marker都没有显示出来
其余之前所进行的Western都很正常
麻烦请各位帮我看看，若有不详尽的部份，请各位提点，谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.64.22.9
1F：推 iiidns:看到圣诞老公公牌 我笑了~~~~ 04/15 20:40
2F：推 bluecsky:用santa Cruz就要多烧香拜拜... 04/15 22:18
3F：推 blence:这篇文章提到的问题跟Santa Cruz产品一点关系也没有阿 04/15 22:34
4F：推 bluecsky:阿哩..我以为他是用santa cruz的antibody..= = 04/15 23:58
5F：推 iiidns:单纯只是因为 我用过 还挺惨烈的... 04/16 08:06
6F：推 liner76:santa cruze 的抗体不好用吗？.... 04/16 13:44
7F：推 teru88:请问你有blocking @@? 04/16 13:49
8F：推 leoblack:santa cruz好的不错~烂的就真的烂到爆~ 04/16 14:31
9F：→ sjacky:有，transfer後 blocking一小时 04/16 21:16