作者conie0831 (cc)
看板Biotech
標題[討論] ligation check?
時間Wed Apr 15 01:26:33 2009
利用PCR方式來確認insert是否有接入vector中(抽完plasmid再做PCR),發現沒有P出
預期片段,只有與空plasmid的結果一樣,但用RE切卻有接近insert大小的band.是否與
primer專一性有關還是insert根本未接入?primer是用當初P出insert的primer
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◆ From: 220.135.98.104
1F：推 yaliu:看看你的vector有沒有primer，可以用它PCR看看 04/15 12:36
2F：→ yaliu:如果你的primer專一性很好，很好P...那我覺得大概沒接入吧 04/15 12:37
3F：推 ribose:用 RE 切 insert 看是否能切出預期的片段 04/15 12:38
4F：推 micocat:insert多大？ 如果只切一刀比較空vector和有insert的size 04/15 12:39
5F：推 ribose:找 1-2 個 RE 切 vector 及 insert 各一刀確認預期片段 04/15 12:43
6F：推 alaric:用insert DNA上的一支primer及vector上的primer互P看看.. 04/16 00:01
7F：→ alaric:另外, colony PCR就可以check了, 不用到抽完plasmid 04/16 00:04
8F：推 moilance:我有這種情形過 可能是plasmid supercoil的問題 04/16 13:46
9F：→ moilance:可把PASMID切一刀後在去PCR SCREENING 04/16 13:47
10F：推 tinapig:PCR有做postive control嗎?(看你原本用什麼template來P的 04/16 22:14
11F：→ tinapig:如果切RE沒有錯誤的話,我會比較相信RE結果~ 04/16 22:14