作者conie0831 (cc)
看板Biotech
标题[讨论] ligation check?
时间Wed Apr 15 01:26:33 2009
利用PCR方式来确认insert是否有接入vector中(抽完plasmid再做PCR),发现没有P出
预期片段,只有与空plasmid的结果一样,但用RE切却有接近insert大小的band.是否与
primer专一性有关还是insert根本未接入?primer是用当初P出insert的primer
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 220.135.98.104
1F：推 yaliu:看看你的vector有没有primer，可以用它PCR看看 04/15 12:36
2F：→ yaliu:如果你的primer专一性很好，很好P...那我觉得大概没接入吧 04/15 12:37
3F：推 ribose:用 RE 切 insert 看是否能切出预期的片段 04/15 12:38
4F：推 micocat:insert多大？ 如果只切一刀比较空vector和有insert的size 04/15 12:39
5F：推 ribose:找 1-2 个 RE 切 vector 及 insert 各一刀确认预期片段 04/15 12:43
6F：推 alaric:用insert DNA上的一支primer及vector上的primer互P看看.. 04/16 00:01
7F：→ alaric:另外, colony PCR就可以check了, 不用到抽完plasmid 04/16 00:04
8F：推 moilance:我有这种情形过 可能是plasmid supercoil的问题 04/16 13:46
9F：→ moilance:可把PASMID切一刀後在去PCR SCREENING 04/16 13:47
10F：推 tinapig:PCR有做postive control吗?(看你原本用什麽template来P的 04/16 22:14
11F：→ tinapig:如果切RE没有错误的话,我会比较相信RE结果~ 04/16 22:14