※ 引述《drave (( ￣ c￣)y▂ξ)》之銘言： : 有學過普通的生物化學 : 但都是粗淺地點到為止... : 想問一下 : 1. : 萬一對未知序列跑PCR的時候 : 那要如何知道要用何種primer? : 這樣頭端的鹼基是未知 不就跑不起來了? : 2. : 接著是RFLP : 最後的步驟不是要用探針去hybrid : 探針不是設計出來的嗎...怎麼知道要設計怎樣的探針 : 才能與那些片段hybrid : 還是說做RFLP的時候待測DNA也要是已知??? 這講的是古典的RFLP,實際上現在幾乎所有人都做PCR-RFLP 原理是先把已知的片段用PCR擴增出來在用限制酵素切割觀察是否有點突變 所以當然必須知道目標序列為何 : 3. : 為什麼AFLP比RFLP更能判讀出差異??? : AFLP不是就等於RFLP+PCR? AFLP是"先用限制酵素切gDNA,再用接合酵素把設計好的核酸接合子黏到切點上 最後再用和接合子互補的引子跑PCR" PCR-RFLP是"先做PCR,再用限制酵素切PCR產物" : RFLP缺點在於限制酵素切的片段太過多 導致條帶可能會連起來 : 這樣AFLP跑出來不會有這種情形嗎 如上所述,AFLP酵素切的範圍是"整個基因體",所以條帶遠多於PCR-RFLP 一般來說,RFLP是針對已知的序列來偵測點突變 AFLP是對序列資訊未知的情況進行研究,兩者對象完全不同 (AFLP光看上面要對整個基因體又切又黏就知道酵素用量會用到破表, 如果發現條帶數太複雜不能用一般膠體分析,還得把引子標螢光跑毛細管電泳... 一言以蔽之,這是一個很貴的技術,所以一般能用RAPD還是用RAPD) : 還是我哪裡搞錯了? : 這樣PCR-RFLP和AFLP有啥不同= ="? --

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