※ 引述《drave (( ￣ c￣)y▂ξ)》之铭言： : 有学过普通的生物化学 : 但都是粗浅地点到为止... : 想问一下 : 1. : 万一对未知序列跑PCR的时候 : 那要如何知道要用何种primer? : 这样头端的硷基是未知 不就跑不起来了? : 2. : 接着是RFLP : 最後的步骤不是要用探针去hybrid : 探针不是设计出来的吗...怎麽知道要设计怎样的探针 : 才能与那些片段hybrid : 还是说做RFLP的时候待测DNA也要是已知??? 这讲的是古典的RFLP,实际上现在几乎所有人都做PCR-RFLP 原理是先把已知的片段用PCR扩增出来在用限制酵素切割观察是否有点突变 所以当然必须知道目标序列为何 : 3. : 为什麽AFLP比RFLP更能判读出差异??? : AFLP不是就等於RFLP+PCR? AFLP是"先用限制酵素切gDNA,再用接合酵素把设计好的核酸接合子黏到切点上 最後再用和接合子互补的引子跑PCR" PCR-RFLP是"先做PCR,再用限制酵素切PCR产物" : RFLP缺点在於限制酵素切的片段太过多 导致条带可能会连起来 : 这样AFLP跑出来不会有这种情形吗 如上所述,AFLP酵素切的范围是"整个基因体",所以条带远多於PCR-RFLP 一般来说,RFLP是针对已知的序列来侦测点突变 AFLP是对序列资讯未知的情况进行研究,两者对象完全不同 (AFLP光看上面要对整个基因体又切又黏就知道酵素用量会用到破表, 如果发现条带数太复杂不能用一般胶体分析,还得把引子标萤光跑毛细管电泳... 一言以蔽之,这是一个很贵的技术,所以一般能用RAPD还是用RAPD) : 还是我哪里搞错了? : 这样PCR-RFLP和AFLP有啥不同= ="? --

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