作者lenti (啄木鳥)
看板Biotech
標題Re: [求救] 請問有人用lentivirus transduct prima …
時間Fri Mar 20 18:17:44 2009
※ 引述《ssLB (can)》之銘言：
: 如題
: 我們利用lentivirus package plasmid
: 希望將我們要的mirco RNA送入primary T cell中
: transduction實驗步驟都依照中研院的RNAi core
: 但是要不就是沒辦法成功要不就是螢光表現量很低
: 但是我們老闆又要我們上flow看百分比
: 這樣的話所剩無幾
: 想請問有人有用過virus成功感染T細胞嗎？
: 不一定要是lentivirus
: （我們的T細胞已經有先用PHA刺激三到四天了）
: 還是說有哪位知道那個學校有哪間實驗室在做這方面的
: 麻煩回B信給我！！
: 感激不盡！！！
照你的描述, 問題應該還是在生產virus的步驟.
lenti是由HIV來的, 不可能無法感染 T cell.
所以我懷疑你的問題出在無法產出足夠titer的lenti-virus.
先問你幾個問題,
1. 當你把三個plasmid送到293T時, 293T細胞的transfection efficiency 有多少？
理想狀況是要九成以上.
2. 你的plasmid是否都正確？
請先用RE 去確認你的所有plasmid都是正確的.
3. 你用的293T是從那來的？用那牌的FBS.？
有些廠牌的FBS是會讓LV的titer很差的. 而且293T的狀況也會決定你產出的titer.
你可以列出你所有的條件, 我可以幫你確認一下, 順便給你一些建議.
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.66
1F：→ hchs890843:我覺得....現在lenti都用VSVG當envelope, 跟WT HIV有差 03/20 18:46
2F：→ hchs890843:不過說實在的，VSV-G更廣效才是 03/20 18:47
3F：推 ranilla:Howard et al(2004).Biophysical Journal 86:1234-42 03/20 21:33
4F：推 aceliang:我想知道FBS的影響有多大...sinica的系統讓我很struggle 03/20 22:51
6F：→ lenti:production_of_neuronpreferenti.php 03/21 03:52
7F：→ lenti:我只能說,就我所知,做出來的lab, 都不是照那個protocol做的. 03/21 03:55
8F：→ lenti:protocol做.照著做的titer都不好. 03/21 03:58
9F：推 hchs890843:maybe是因為他只收40hrs的virus...我學姐一開始叫我收 03/23 09:25
10F：→ hchs890843:五天...加一起去離心來用 03/23 09:26