作者lenti (啄木鸟)
看板Biotech
标题Re: [求救] 请问有人用lentivirus transduct prima …
时间Fri Mar 20 18:17:44 2009
※ 引述《ssLB (can)》之铭言：
: 如题
: 我们利用lentivirus package plasmid
: 希望将我们要的mirco RNA送入primary T cell中
: transduction实验步骤都依照中研院的RNAi core
: 但是要不就是没办法成功要不就是萤光表现量很低
: 但是我们老板又要我们上flow看百分比
: 这样的话所剩无几
: 想请问有人有用过virus成功感染T细胞吗？
: 不一定要是lentivirus
: （我们的T细胞已经有先用PHA刺激三到四天了）
: 还是说有哪位知道那个学校有哪间实验室在做这方面的
: 麻烦回B信给我！！
: 感激不尽！！！
照你的描述, 问题应该还是在生产virus的步骤.
lenti是由HIV来的, 不可能无法感染 T cell.
所以我怀疑你的问题出在无法产出足够titer的lenti-virus.
先问你几个问题,
1. 当你把三个plasmid送到293T时, 293T细胞的transfection efficiency 有多少？
理想状况是要九成以上.
2. 你的plasmid是否都正确？
请先用RE 去确认你的所有plasmid都是正确的.
3. 你用的293T是从那来的？用那牌的FBS.？
有些厂牌的FBS是会让LV的titer很差的. 而且293T的状况也会决定你产出的titer.
你可以列出你所有的条件, 我可以帮你确认一下, 顺便给你一些建议.
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.125.66
1F：→ hchs890843:我觉得....现在lenti都用VSVG当envelope, 跟WT HIV有差 03/20 18:46
2F：→ hchs890843:不过说实在的，VSV-G更广效才是 03/20 18:47
3F：推 ranilla:Howard et al(2004).Biophysical Journal 86:1234-42 03/20 21:33
4F：推 aceliang:我想知道FBS的影响有多大...sinica的系统让我很struggle 03/20 22:51
6F：→ lenti:production_of_neuronpreferenti.php 03/21 03:52
7F：→ lenti:我只能说,就我所知,做出来的lab, 都不是照那个protocol做的. 03/21 03:55
8F：→ lenti:protocol做.照着做的titer都不好. 03/21 03:58
9F：推 hchs890843:maybe是因为他只收40hrs的virus...我学姐一开始叫我收 03/23 09:25
10F：→ hchs890843:五天...加一起去离心来用 03/23 09:26