作者Ybow (名揚四海)
看板Biotech
標題[討論] 有關real time PCR 的條件
時間Thu Mar 19 17:29:07 2009
最近在學real time PCR 有兩個疑問 希望有經驗的前輩可以說明一下
1.我用SYBR GREEN 手冊裡提到primer濃度不可以太高 避免non specific
這樣是不是表示我要每個gene都先用agarose gel跑一遍
調到至少肉眼看不見primer-primer band?
還是說我開始的primer濃度大家一樣就行了?
2.手冊裡用的cycle都是40個 比一般PCR高了不少
但我聽說PCR cycle太多產物反而會degrade
請問有這回事嗎? 我是否應該調整cycyle數呢?
以上兩個問題 請有經驗的高手指點一下 謝謝
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◆ From: 140.109.55.237
1F：推 zoom8080:Roche LightCycler480 最終濃度0.03uM OK 03/19 21:44
2F：推 candy315:起初先用agarose gel跑是必要的..因為至少要做到只有sing 03/19 22:39
3F：→ candy315:single band，但最終還是要上機跑過disociation才能確認 03/19 22:40
4F：→ candy315:是不是有non specific band 03/19 22:40