作者Ybow (名扬四海)
看板Biotech
标题[讨论] 有关real time PCR 的条件
时间Thu Mar 19 17:29:07 2009
最近在学real time PCR 有两个疑问 希望有经验的前辈可以说明一下
1.我用SYBR GREEN 手册里提到primer浓度不可以太高 避免non specific
这样是不是表示我要每个gene都先用agarose gel跑一遍
调到至少肉眼看不见primer-primer band?
还是说我开始的primer浓度大家一样就行了?
2.手册里用的cycle都是40个 比一般PCR高了不少
但我听说PCR cycle太多产物反而会degrade
请问有这回事吗? 我是否应该调整cycyle数呢?
以上两个问题 请有经验的高手指点一下 谢谢
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◆ From: 140.109.55.237
1F：推 zoom8080:Roche LightCycler480 最终浓度0.03uM OK 03/19 21:44
2F：推 candy315:起初先用agarose gel跑是必要的..因为至少要做到只有sing 03/19 22:39
3F：→ candy315:single band，但最终还是要上机跑过disociation才能确认 03/19 22:40
4F：→ candy315:是不是有non specific band 03/19 22:40