作者ksn (洛)
看板Biotech
標題[求救]SDS-PAGE,DTT treat後蛋白成single band,但位置不對
時間Wed Mar 18 20:34:25 2009
純化蛋白,SDS-PAGE確認時出現4個band,
為了確定是isoform 還是雜蛋白，同一管取出，分成兩管
A. 原sample + protein dye
B. 原sample + protein dye(100 mM DTT), heat 95度 5 min , ice 1 min,
跑 SDS-PAGE，Coomassie Blue 染色後發現
A. 3 bands， 大約48 kDa, 32 kDa, 16 kDa
B. 1 band 大約 19 kDa
類似下圖
A. B.
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想請問為什麼DTT treat 後，會發生位移的情況呢？
能被解釋或是我有沒有處理好的地方嗎？？？
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.61.117
1F：推 tsubasawolfy:我會比較相信B才是你要的XD 去查DTT作用就知道了 03/18 21:01
2F：→ ksn:喔喔 另外我的意思是若為isoform 為什麼B不會到16kDa的位置呢? 03/19 11:16
3F：推 tsubasawolfy:沒有denature狀態下分子量沒意義吧? 03/19 11:35
4F：→ tsubasawolfy:變成只是SDS包附蛋白表面而不是依據完整的包覆 03/19 11:37
5F：推 uokoperfect:跑SDS-PAGE了幹麻還要加dtt...維持構型?不是要看分子 03/20 19:19
6F：→ uokoperfect:量嗎....NATIVE GEL 加了比較有意義吧 03/20 19:19
7F：→ uokoperfect:我也認為B有加熱過DENATURE才是你要的............... 03/20 19:20
8F：推 uokoperfect:dtt濃度高一點 的確可以打破雙硫鍵 也是有助denature 03/20 19:27
9F：推 uokoperfect:看你的濃度應該是把雙硫鍵都打斷了吧 變線性的 03/20 19:29