作者ksn (洛)
看板Biotech
标题[求救]SDS-PAGE,DTT treat後蛋白成single band,但位置不对
时间Wed Mar 18 20:34:25 2009
纯化蛋白,SDS-PAGE确认时出现4个band,
为了确定是isoform 还是杂蛋白，同一管取出，分成两管
A. 原sample + protein dye
B. 原sample + protein dye(100 mM DTT), heat 95度 5 min , ice 1 min,
跑 SDS-PAGE，Coomassie Blue 染色後发现
A. 3 bands， 大约48 kDa, 32 kDa, 16 kDa
B. 1 band 大约 19 kDa
类似下图
A. B.
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想请问为什麽DTT treat 後，会发生位移的情况呢？
能被解释或是我有没有处理好的地方吗？？？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.61.117
1F：推 tsubasawolfy:我会比较相信B才是你要的XD 去查DTT作用就知道了 03/18 21:01
2F：→ ksn:喔喔 另外我的意思是若为isoform 为什麽B不会到16kDa的位置呢? 03/19 11:16
3F：推 tsubasawolfy:没有denature状态下分子量没意义吧? 03/19 11:35
4F：→ tsubasawolfy:变成只是SDS包附蛋白表面而不是依据完整的包覆 03/19 11:37
5F：推 uokoperfect:跑SDS-PAGE了干麻还要加dtt...维持构型?不是要看分子 03/20 19:19
6F：→ uokoperfect:量吗....NATIVE GEL 加了比较有意义吧 03/20 19:19
7F：→ uokoperfect:我也认为B有加热过DENATURE才是你要的............... 03/20 19:20
8F：推 uokoperfect:dtt浓度高一点 的确可以打破双硫键 也是有助denature 03/20 19:27
9F：推 uokoperfect:看你的浓度应该是把双硫键都打断了吧 变线性的 03/20 19:29