作者willie0208 (我不要現在就出征....)
看板Biotech
標題[求救] RIPA buffer
時間Wed Mar 11 11:42:42 2009
請問各位大大
有人用過RIPA 來裂解過組織來抽蛋白嗎??
western blot一直做不出來
跟本不知道什麼問題
從源頭找 想問RIPA是可以用來抽組織的蛋白
還是只能抽CELL內的蛋白呢??
謝謝各位大大
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◆ From: 203.71.94.5
1F：推 ordinary07:可以 ripa+sample->均質sample->on ice 數分鐘 03/11 12:15
2F：→ ordinary07:而且你做protein定量有出來嗎!? 沒出來WB也免做了 冏 03/11 12:17
3F：→ ordinary07:有興趣可以看看abcam的WB protocol 03/11 12:17
4F：→ willie0208:有定量出來 只是跑出來的蛋白質都很醜 我在前面有留言 03/11 12:47
5F：→ willie0208:有我跑WESTERN得圖 一整個都很怪 找不出原因說 03/11 12:47
6F：推 ordinary07:你把上膠拉長點 你樣品的蛋白質濃度很濃嗎!? 03/11 12:53
7F：推 ordinary07:還有跑的時候V小點 不知道有沒有改善... 冏 03/11 12:56
8F：→ willie0208:我的蛋白質濃度約在50microG上下 我的V分三個段落跑 03/11 13:53
9F：→ willie0208:分別為80-20MIN 90-1hrs 100-跑到最後 03/11 13:53
10F：推 tsubasawolfy:跑的時候多跑一組細胞的試試看就知道了 03/11 13:56
11F：→ tsubasawolfy:看是sample本身的問題還是WB的問題 03/11 13:56
12F：推 takumatw:趁機問一下什麼是"做蛋白定量有出來" 03/11 17:09
13F：→ takumatw:吸光值多少或是濃度多少以上才算有出來???是這意思嘛? 03/11 17:09
14F：推 ordinary07:OD介於你標準曲線0~最低濃度BSA點間 濃度就太低了 03/11 17:22
15F：推 tincta:我有用ripa抽過組織和細胞做western blot ，都沒問題說 03/12 00:22