作者willie0208 (我不要现在就出征....)
看板Biotech
标题[求救] RIPA buffer
时间Wed Mar 11 11:42:42 2009
请问各位大大
有人用过RIPA 来裂解过组织来抽蛋白吗??
western blot一直做不出来
跟本不知道什麽问题
从源头找 想问RIPA是可以用来抽组织的蛋白
还是只能抽CELL内的蛋白呢??
谢谢各位大大
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.71.94.5
1F：推 ordinary07:可以 ripa+sample->均质sample->on ice 数分钟 03/11 12:15
2F：→ ordinary07:而且你做protein定量有出来吗!? 没出来WB也免做了 冏 03/11 12:17
3F：→ ordinary07:有兴趣可以看看abcam的WB protocol 03/11 12:17
4F：→ willie0208:有定量出来 只是跑出来的蛋白质都很丑 我在前面有留言 03/11 12:47
5F：→ willie0208:有我跑WESTERN得图 一整个都很怪 找不出原因说 03/11 12:47
6F：推 ordinary07:你把上胶拉长点 你样品的蛋白质浓度很浓吗!? 03/11 12:53
7F：推 ordinary07:还有跑的时候V小点 不知道有没有改善... 冏 03/11 12:56
8F：→ willie0208:我的蛋白质浓度约在50microG上下 我的V分三个段落跑 03/11 13:53
9F：→ willie0208:分别为80-20MIN 90-1hrs 100-跑到最後 03/11 13:53
10F：推 tsubasawolfy:跑的时候多跑一组细胞的试试看就知道了 03/11 13:56
11F：→ tsubasawolfy:看是sample本身的问题还是WB的问题 03/11 13:56
12F：推 takumatw:趁机问一下什麽是"做蛋白定量有出来" 03/11 17:09
13F：→ takumatw:吸光值多少或是浓度多少以上才算有出来???是这意思嘛? 03/11 17:09
14F：推 ordinary07:OD介於你标准曲线0~最低浓度BSA点间 浓度就太低了 03/11 17:22
15F：推 tincta:我有用ripa抽过组织和细胞做western blot ，都没问题说 03/12 00:22