作者bf (逼愛撫)
看板Biotech
標題[求救] western blot的小蛋白質...
時間Tue Mar 3 23:57:48 2009
想請問大家...
有沒有人跑過15kd以下的小蛋白質western blot呢?
我現在遇到一個窘境...
就是我從組織抽出來的protein拿來跑膠
15kd以下的蛋白質都會不見...嗚哇~
這倒底是為什麼啊~~~
我染過coomassie blue也染過ponceau s
可是小分子的都看不到>"<
我的條件如下...
．1.0mm minigel
．一般SDS-PAGE和Tricine SDS-PAGE都跑過 結果一樣...
．80V→130V
．sample都有1:1加loading buffer 加熱95℃ 5~10分鐘
．確定沒跳海...
．確定不是transfer的問題...
有沒有高手有辦法解決啊 愈做愈無力了...
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 119.77.163.157
1F：推 sGoat:有看到marker嗎?不管在transfer或是SDS-PAGD上? 03/04 00:35
2F：推 alaric:?? %-SDS-PAGE 我都用22%. 03/04 02:01
3F：推 tsubasawolfy:實驗室有錢又不想浪費精力在這種抓條件western上的話 03/04 07:35
4F：→ tsubasawolfy:直接去買gradient gel搭配不同buffer.. 03/04 07:36
5F：→ tsubasawolfy:現在用的Invitrogen NuPAGE配MES buffer連3K都分的 03/04 07:37
6F：→ tsubasawolfy:很開 不過一片gel相當於吃一頓燒肉屋就是了- - 03/04 07:38
7F：推 bider:membrane 孔徑大小多少? 03/04 11:59
8F：→ bf:pall的 0.2um PVDF 03/04 13:32