作者bf (逼爱抚)
看板Biotech
标题[求救] western blot的小蛋白质...
时间Tue Mar 3 23:57:48 2009
想请问大家...
有没有人跑过15kd以下的小蛋白质western blot呢?
我现在遇到一个窘境...
就是我从组织抽出来的protein拿来跑胶
15kd以下的蛋白质都会不见...呜哇~
这倒底是为什麽啊~~~
我染过coomassie blue也染过ponceau s
可是小分子的都看不到>"<
我的条件如下...
．1.0mm minigel
．一般SDS-PAGE和Tricine SDS-PAGE都跑过 结果一样...
．80V→130V
．sample都有1:1加loading buffer 加热95℃ 5~10分钟
．确定没跳海...
．确定不是transfer的问题...
有没有高手有办法解决啊 愈做愈无力了...
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 119.77.163.157
1F：推 sGoat:有看到marker吗?不管在transfer或是SDS-PAGD上? 03/04 00:35
2F：推 alaric:?? %-SDS-PAGE 我都用22%. 03/04 02:01
3F：推 tsubasawolfy:实验室有钱又不想浪费精力在这种抓条件western上的话 03/04 07:35
4F：→ tsubasawolfy:直接去买gradient gel搭配不同buffer.. 03/04 07:36
5F：→ tsubasawolfy:现在用的Invitrogen NuPAGE配MES buffer连3K都分的 03/04 07:37
6F：→ tsubasawolfy:很开 不过一片gel相当於吃一顿烧肉屋就是了- - 03/04 07:38
7F：推 bider:membrane 孔径大小多少? 03/04 11:59
8F：→ bf:pall的 0.2um PVDF 03/04 13:32