作者HeartReader ( Swimming is Flying )
看板Biotech
標題[方法] 請問自己配spin column
時間Sun Mar 1 19:56:37 2009
我買了bio-rad 的empty bio spin column (bed volume = 1.1 ml)
& GE healthcare 的 Sephadex G-15 (Fractional Range < 1500)
實驗目的 : 為了分離 Cy5 NHS-ester (Mw = 792) 和 我要的 Cy5-RNA (Mw = 4200)
測試想法 : 先用Dylight 649 (Mw = 1008)來看看 elute 出來會不會有螢光(希望沒有)
自己pack, 有做 equilibrate, 然後1000 x g 1 minute 去掉equilibrium buffer,
再上說明書上建議的sample volume, 然後1000 x g 1 minute
結果.... 有螢光......orz (不過亮度有變淡)
問題:
1. retention 效率不如說明書上寫的99%, 有什麼我可以改進的嗎?
2. 應該可以上 RNA了, 我需要擔心 Mw = 4200 照上述做法會 "還" 沒出來嗎?
3. 用 Spin column的好處之一就是不會dilute sample , 對嗎?
4. 有沒有 Mw = 4000 左右的biomolecular可以建議試試看?
希望好心人可以幫我解惑, 身上P幣可以全部奉上(不多@@>)
謝謝:)
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