作者HeartReader ( Swimming is Flying )
看板Biotech
标题[方法] 请问自己配spin column
时间Sun Mar 1 19:56:37 2009
我买了bio-rad 的empty bio spin column (bed volume = 1.1 ml)
& GE healthcare 的 Sephadex G-15 (Fractional Range < 1500)
实验目的 : 为了分离 Cy5 NHS-ester (Mw = 792) 和 我要的 Cy5-RNA (Mw = 4200)
测试想法 : 先用Dylight 649 (Mw = 1008)来看看 elute 出来会不会有萤光(希望没有)
自己pack, 有做 equilibrate, 然後1000 x g 1 minute 去掉equilibrium buffer,
再上说明书上建议的sample volume, 然後1000 x g 1 minute
结果.... 有萤光......orz (不过亮度有变淡)
问题:
1. retention 效率不如说明书上写的99%, 有什麽我可以改进的吗?
2. 应该可以上 RNA了, 我需要担心 Mw = 4200 照上述做法会 "还" 没出来吗?
3. 用 Spin column的好处之一就是不会dilute sample , 对吗?
4. 有没有 Mw = 4000 左右的biomolecular可以建议试试看?
希望好心人可以帮我解惑, 身上P币可以全部奉上(不多@@>)
谢谢:)
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