作者plokij5668 (落花滿天蔽月光)
看板Biotech
標題[求救] PCR結果一直是smear的狀態？！
時間Wed Feb 25 15:48:45 2009
目前在做PCR
之前做不同的時間點都做的出來
現在重P～跑出來的結果
有的時間點有band
但大部份卻都看不出來有 band
都糊糊的一片
是因為reaction buffer裡面離子濃度的問題嗎
我的annealing 溫度是67 度
extention 的時間是1 min （片段約1.2kb）
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 123.240.155.105
1F：推 sGoat:可能是template沒有保存好,跑片膠看看有沒有smear 02/25 15:57
2F：→ sGoat:不然就是縮短染色與退染時間... 02/25 15:58
3F：→ plokij5668:template 有試過～是沒有問題的～我會試試縮短染膠的 02/25 16:12
4F：→ plokij5668:的時間～感恩阿！ 02/25 16:13
5F：推 oxoox:我有遇過這樣的情況 結果是mg的濃度不對 稍微調一下就好了 02/25 21:51
6F：推 Menuet:你有沒有查過你的primer適合哪種溫度呀? 02/25 21:55
7F：推 kane0419:Mg的濃度大概多少到多少比較好？ 02/25 21:58
8F：推 porker:可以試試降低Mg濃度或用hot-start 的Taq做看看 02/25 22:59
9F：推 ookubo:請問一下重p的時候，template是用原本的還是用PCR product? 02/26 06:52
10F：推 yalinn:buffer或是dNTP壞掉 之前也是這樣的結果 02/27 18:09