※ 引述《Rodrigo (另一場奮鬥的開始)》之銘言： : 冷凍切片是背根神經節 : 染G-CSFR : 然後用ABC : 最後用DAB : 屢次發現染出的切片 : Neuron的細胞核呈現淡染 : 這是正常應該出現的 : 但是其他細胞也被染到 : 而且很明顯 : 特別深的都是細胞核 : 但胞質並沒有被染到 : 如何把那些不該出現的深染細胞核消除? : 以下是我的猜測 : 似乎Biotin會黏核酸!? 這個不太可能 雖然沒有染過神經 不過就我用ABC system的經驗是沒碰過在細胞核有non-specific binding 通常ABC system會有的非專一性染色問題 是在肝臟或腎臟等有大量endogenous biotin的場合 一抗有時也是非專一性共染的元兇 建議你做一個normal IgG的negative control 這樣你至少可以釐清可能是哪個步驟出了問題 : 在一次失誤中 : 發現切片泡過過鹼的tris buffer : 似乎是鹼使核酸變性!? : 使的亂染的細胞核沒有出現 : 但這不是好方法 : 因為這不是peroxidase最佳pH環境 : 如果biotin真的會黏核酸 : 那給切片處以DNase : 或在DAB呈色之前以鹼處理 : 是否可行? --

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