※ 引述《Rodrigo (另一场奋斗的开始)》之铭言： : 冷冻切片是背根神经节 : 染G-CSFR : 然後用ABC : 最後用DAB : 屡次发现染出的切片 : Neuron的细胞核呈现淡染 : 这是正常应该出现的 : 但是其他细胞也被染到 : 而且很明显 : 特别深的都是细胞核 : 但胞质并没有被染到 : 如何把那些不该出现的深染细胞核消除? : 以下是我的猜测 : 似乎Biotin会黏核酸!? 这个不太可能 虽然没有染过神经 不过就我用ABC system的经验是没碰过在细胞核有non-specific binding 通常ABC system会有的非专一性染色问题 是在肝脏或肾脏等有大量endogenous biotin的场合 一抗有时也是非专一性共染的元凶 建议你做一个normal IgG的negative control 这样你至少可以厘清可能是哪个步骤出了问题 : 在一次失误中 : 发现切片泡过过硷的tris buffer : 似乎是硷使核酸变性!? : 使的乱染的细胞核没有出现 : 但这不是好方法 : 因为这不是peroxidase最佳pH环境 : 如果biotin真的会黏核酸 : 那给切片处以DNase : 或在DAB呈色之前以硷处理 : 是否可行? --

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