作者mito0222 (MISA)
看板Biotech
標題Re: [問題]DAPI染色
時間Mon Feb 23 06:31:29 2009
不好意思 我想問的第個問題是
貼壁細胞 通常 直接在dich或well中 wash 固定 染色 拍照
那麼懸浮細胞 是離心後 wash pellet 在tube裡 固定和染色嗎?
那樣該怎麼拍照及定量??(貼壁細胞是直接在dich或well內 記數固定視野的細胞螢光)
※ 引述《mito0222 (MISA)》之銘言：
: 貼壁細胞 通常是WASH 固定後 在染DAPI 之後再用螢光顯微鏡拍照
: 請問懸浮細胞 要怎麼做凋亡現象的染色呢
: 另外再請問DAPI 可用PI取代嗎? 這兩者有何不同
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◆ From: 218.175.51.13
1F：推 leoblack:沒作過所以不敢大放噘詞~但要"定量"是否就要到flow才準?! 02/23 09:18
我說定量的意思是指 每多少顆細胞內有多少顆有DAPI的螢光
※ 編輯: mito0222 來自: 218.175.51.13 (02/23 20:00)
2F：推 happypipi:我之前做的時候,是用拍照軟體各取三個視野 02/24 01:59
3F：→ happypipi:然後算平均值 02/24 01:59
4F：→ happypipi:可是這樣會有很嚴重的主觀誤差... 02/24 01:59
5F：→ happypipi:因為自己想選多就照多的地方= =a 02/24 02:00
6F：→ happypipi:所以這種實驗只能算是半定量.要真的準確定量要用flow 02/24 02:00
7F：→ happypipi:拍照真的很麻煩...一個well拍三次,一個濃度有三重複 02/24 02:03
8F：→ happypipi:而且染也不可以染太久..背景會太亮 02/24 02:03
9F：推 ordinary07:你可以找找看paper 我有看過有些會改變培養環境 02/24 23:24
10F：→ ordinary07:使細胞有更大機會附著 然後觀察的相關方法 冏> 02/24 23:25
11F：推 ordinary07:gelatin-coated glass-bottom dish to immobilize 02/24 23:44
12F：推 tyh0104:可以用cytospin機器把懸浮細胞打上slide再fix 02/25 22:17
13F：→ tyh0104:之後染色等等就跟貼壁細胞的作法差不多 02/25 22:18