作者mito0222 (MISA)
看板Biotech
标题Re: [问题]DAPI染色
时间Mon Feb 23 06:31:29 2009
不好意思 我想问的第个问题是
贴壁细胞 通常 直接在dich或well中 wash 固定 染色 拍照
那麽悬浮细胞 是离心後 wash pellet 在tube里 固定和染色吗?
那样该怎麽拍照及定量??(贴壁细胞是直接在dich或well内 记数固定视野的细胞萤光)
※ 引述《mito0222 (MISA)》之铭言：
: 贴壁细胞 通常是WASH 固定後 在染DAPI 之後再用萤光显微镜拍照
: 请问悬浮细胞 要怎麽做凋亡现象的染色呢
: 另外再请问DAPI 可用PI取代吗? 这两者有何不同
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◆ From: 218.175.51.13
1F：推 leoblack:没作过所以不敢大放噘词~但要"定量"是否就要到flow才准?! 02/23 09:18
我说定量的意思是指 每多少颗细胞内有多少颗有DAPI的萤光
※ 编辑: mito0222 来自: 218.175.51.13 (02/23 20:00)
2F：推 happypipi:我之前做的时候,是用拍照软体各取三个视野 02/24 01:59
3F：→ happypipi:然後算平均值 02/24 01:59
4F：→ happypipi:可是这样会有很严重的主观误差... 02/24 01:59
5F：→ happypipi:因为自己想选多就照多的地方= =a 02/24 02:00
6F：→ happypipi:所以这种实验只能算是半定量.要真的准确定量要用flow 02/24 02:00
7F：→ happypipi:拍照真的很麻烦...一个well拍三次,一个浓度有三重复 02/24 02:03
8F：→ happypipi:而且染也不可以染太久..背景会太亮 02/24 02:03
9F：推 ordinary07:你可以找找看paper 我有看过有些会改变培养环境 02/24 23:24
10F：→ ordinary07:使细胞有更大机会附着 然後观察的相关方法 冏> 02/24 23:25
11F：推 ordinary07:gelatin-coated glass-bottom dish to immobilize 02/24 23:44
12F：推 tyh0104:可以用cytospin机器把悬浮细胞打上slide再fix 02/25 22:17
13F：→ tyh0104:之後染色等等就跟贴壁细胞的作法差不多 02/25 22:18