作者bf (逼愛撫)
看板Biotech
標題[求救] 小於15kd的蛋白在跑western都不見了
時間Sat Feb 21 22:01:17 2009
請問一下板上的大大
我最近在跑小分子的western blot
可是在跑膠的時候小分子蛋白就都不見了...
我的膠是12%的separating gel
跑的時候先跑80V轉120V
可以先排除跳海的可能性 因為最小10kd的marker都還看得到
而且15kd大小的蛋白質還在膠的中間...
跑完之後去染comassie blue只有15~20kd以上的蛋白質看得到 @@
小於15kd的都很乾淨 囧
可以請問這是什麼情形嗎@@
有什麼方法可以改善呢?
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PS 我是用SDS-PAGE 有爬文過可能用tricine的方法會比較好
不過如果要用SDS-PAGE的方法 有什麼辦法可以讓我的小分子起死回生嗎?
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 119.77.163.157
1F：推 leoblack:你的acryamide是29:1的嗎!?小分子好像用60:1的跑比較好 02/21 22:08
2F：→ leoblack:不過建議你PAGE還是用銀染比較準~comassie blue靈敏度差 02/21 22:08
3F：→ bf:嗯嗯 我的是29:1 commercial的... 02/21 23:15
4F：→ bf:明天我去實驗室看看有沒有銀染的材料好了XD 02/21 23:16
5F：→ bf:謝謝leo大大哦^^ 02/21 23:16
6F：推 xenosdk:你comassie blue染色是transfer之前還是之後? 02/22 01:00
7F：→ bf:transfer之前 02/22 10:40
8F：推 bluecsky:tansfer之後還染的到也很神奇XDDD 02/22 20:15
9F：推 newivan:可改用孔隙較小的membrane做transfer,一般常用的是0.45um, 02/23 11:35
10F：→ newivan:小於20KDa的protein容易穿過,可改用0.22um的試看看 02/23 11:36
11F：→ bf:我用的已經是0.2um的了說QQ 02/23 15:14