作者bf (逼爱抚)
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标题[求救] 小於15kd的蛋白在跑western都不见了
时间Sat Feb 21 22:01:17 2009
请问一下板上的大大
我最近在跑小分子的western blot
可是在跑胶的时候小分子蛋白就都不见了...
我的胶是12%的separating gel
跑的时候先跑80V转120V
可以先排除跳海的可能性 因为最小10kd的marker都还看得到
而且15kd大小的蛋白质还在胶的中间...
跑完之後去染comassie blue只有15~20kd以上的蛋白质看得到 @@
小於15kd的都很乾净 囧
可以请问这是什麽情形吗@@
有什麽方法可以改善呢?
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PS 我是用SDS-PAGE 有爬文过可能用tricine的方法会比较好
不过如果要用SDS-PAGE的方法 有什麽办法可以让我的小分子起死回生吗?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 119.77.163.157
1F：推 leoblack:你的acryamide是29:1的吗!?小分子好像用60:1的跑比较好 02/21 22:08
2F：→ leoblack:不过建议你PAGE还是用银染比较准~comassie blue灵敏度差 02/21 22:08
3F：→ bf:嗯嗯 我的是29:1 commercial的... 02/21 23:15
4F：→ bf:明天我去实验室看看有没有银染的材料好了XD 02/21 23:16
5F：→ bf:谢谢leo大大哦^^ 02/21 23:16
6F：推 xenosdk:你comassie blue染色是transfer之前还是之後? 02/22 01:00
7F：→ bf:transfer之前 02/22 10:40
8F：推 bluecsky:tansfer之後还染的到也很神奇XDDD 02/22 20:15
9F：推 newivan:可改用孔隙较小的membrane做transfer,一般常用的是0.45um, 02/23 11:35
10F：→ newivan:小於20KDa的protein容易穿过,可改用0.22um的试看看 02/23 11:36
11F：→ bf:我用的已经是0.2um的了说QQ 02/23 15:14