作者ymme (隨風起飛)
看板Biotech
標題[求救] lentivirus production
時間Fri Feb 20 00:37:47 2009
我想請教大家有關於lentivirus的production
本實驗室是採用中研院RNAi core facility的系統
在做幾次production後,發現就算是control virus (shLuc)也是titer變化相當大
R.I.U.從100多到30000 IU/ul都有過 (用A549. Resazurin assay)
293T 是解凍後3~5代, transfection滿度約70~80% (60 mm dish)
plasmid是用Geneaid Midi kit抽的. OD ratio落在1.8~1.85之間
用lipofectamine 2000 transfect 3 hr, DNA: lipo= 1:1
transfection efficiency約70~80%
兩次收細胞時間點看細胞狀況都還ok,沒有大量死亡的現象
有點不太知道問題出在哪裡
希望大家幫忙解惑一下.謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 61.217.162.25
1F：推 xenosdk:lentivirus就是這樣... 到現在還有一堆人在發lentivirus 02/22 01:03
2F：→ xenosdk:optimization的paper... 滿多condition要試的 02/22 01:04
3F：→ xenosdk:而且感覺上並沒有什麼邏輯.. 如果不是要大量生產 02/22 01:05
4F：→ xenosdk:就多是幾次取最好的titer就好.. 02/22 01:06
5F：推 bobbygau:我是用QIAGEN midi,結果還好。plasmid conformation才是 02/26 16:22
6F：→ bobbygau:影響transfection效率的主因。另請確認Lipo與DNA的ratio 02/26 16:24
7F：→ bobbygau:1:1似乎太低了，試試用Lipo2000:DNA=3:1 02/26 16:27
8F：推 Danielle:lipo太少了 請看他的說明書 03/23 22:37