作者ymme (随风起飞)
看板Biotech
标题[求救] lentivirus production
时间Fri Feb 20 00:37:47 2009
我想请教大家有关於lentivirus的production
本实验室是采用中研院RNAi core facility的系统
在做几次production後,发现就算是control virus (shLuc)也是titer变化相当大
R.I.U.从100多到30000 IU/ul都有过 (用A549. Resazurin assay)
293T 是解冻後3~5代, transfection满度约70~80% (60 mm dish)
plasmid是用Geneaid Midi kit抽的. OD ratio落在1.8~1.85之间
用lipofectamine 2000 transfect 3 hr, DNA: lipo= 1:1
transfection efficiency约70~80%
两次收细胞时间点看细胞状况都还ok,没有大量死亡的现象
有点不太知道问题出在哪里
希望大家帮忙解惑一下.谢谢
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.217.162.25
1F：推 xenosdk:lentivirus就是这样... 到现在还有一堆人在发lentivirus 02/22 01:03
2F：→ xenosdk:optimization的paper... 满多condition要试的 02/22 01:04
3F：→ xenosdk:而且感觉上并没有什麽逻辑.. 如果不是要大量生产 02/22 01:05
4F：→ xenosdk:就多是几次取最好的titer就好.. 02/22 01:06
5F：推 bobbygau:我是用QIAGEN midi,结果还好。plasmid conformation才是 02/26 16:22
6F：→ bobbygau:影响transfection效率的主因。另请确认Lipo与DNA的ratio 02/26 16:24
7F：→ bobbygau:1:1似乎太低了，试试用Lipo2000:DNA=3:1 02/26 16:27
8F：推 Danielle:lipo太少了 请看他的说明书 03/23 22:37