作者ken0123 ()
看板Biotech
標題[求救]關於 bisulfite modification 的步驟
時間Wed Feb 18 22:03:14 2009
1. DNA用 2MNaOH 在37℃處理 10min
2. 加入250μl(1.5M)的NaS2O5與30μl(10m)的hydroquinone
3. 放入熱水浴中50℃、16~18小時
4. 使用promega DNA clean-up kit進行純化
5. 加入50μl(0.6N)的NaOH靜置五分鐘
6. 加入10μ的NaS2O5與500μl(100％)的酒精
7. 放在-20℃中靜置20分鐘
8. 以12000rpm離心20分鐘，倒去上清液
9. 加入500μl(75％)的酒精，以12000rpm離心15分鐘，接著進行抽氣
10.加入50μl的ddH2O放置在37℃下1小時回溶DNA
以上大概步驟是這樣
我想請問有做過甲基化的大大
為什麼DNA經過純化之後還要在經過NaOH處理呢?
這個是有什麼特別的目的嗎?
另外,hydroquinone加在NaS2O5裡面的目的是什麼啊??
希望有好心人士可以幫我解答!
感激不盡~
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◆ From: 163.23.212.175
2F：→ solom:NaOH處理是為了將六號碳上的亞硫酸根脫去 02/19 12:42
3F：→ solom:加HQ的目的似乎是作為抗氧化劑的角色 02/19 12:43
4F：→ ken0123:感謝樓上大大 02/19 14:03