作者ken0123 ()
看板Biotech
标题[求救]关於 bisulfite modification 的步骤
时间Wed Feb 18 22:03:14 2009
1. DNA用 2MNaOH 在37℃处理 10min
2. 加入250μl(1.5M)的NaS2O5与30μl(10m)的hydroquinone
3. 放入热水浴中50℃、16~18小时
4. 使用promega DNA clean-up kit进行纯化
5. 加入50μl(0.6N)的NaOH静置五分钟
6. 加入10μ的NaS2O5与500μl(100％)的酒精
7. 放在-20℃中静置20分钟
8. 以12000rpm离心20分钟，倒去上清液
9. 加入500μl(75％)的酒精，以12000rpm离心15分钟，接着进行抽气
10.加入50μl的ddH2O放置在37℃下1小时回溶DNA
以上大概步骤是这样
我想请问有做过甲基化的大大
为什麽DNA经过纯化之後还要在经过NaOH处理呢?
这个是有什麽特别的目的吗?
另外,hydroquinone加在NaS2O5里面的目的是什麽啊??
希望有好心人士可以帮我解答!
感激不尽~
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◆ From: 163.23.212.175
2F：→ solom:NaOH处理是为了将六号碳上的亚硫酸根脱去 02/19 12:42
3F：→ solom:加HQ的目的似乎是作为抗氧化剂的角色 02/19 12:43
4F：→ ken0123:感谢楼上大大 02/19 14:03