作者winterhsu (winterhsu)
看板Biotech
標題[求救] fibroblast可以凍嗎?
時間Sat Feb 14 01:12:55 2009
我之前養firbroblast
曾經有試過先凍個1~2個禮拜再解凍是可以活的
可是最近去解凍fibroblast的時候
全部都沒有活
我有的凍在-70有的是凍在液態氮
可是解凍的結果卻是都沒有活
因為我們實驗室之前沒有做過fibroblast
所以也不太知道要怎麼用
只是照網路上找到的paper裡面的方法來養
想問一下大家... fibroblast可以凍起來嗎?!
還是說有什麼條件呢?!
謝謝大家~~~
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◆ From: 118.161.215.135
1F：推 crement:可以，一般標準冰細胞程序就可以了 02/14 11:04
2F：→ winterhsu:恩...可是我們凍起來的細胞卻都死光了,好煩惱喲!! 02/14 15:15
3F：推 conective:你應該給的是你的PROTOCOL 才看得出是哪裡出問題 02/14 18:04
4F：推 humwang:你應該說明你的fibroblast是primary culture還是cell line 02/14 22:17
5F：→ humwang:cell line的話,把細胞凍起來已經是標準程序了 02/14 22:18
6F：→ humwang:primary culture的話,也許有點麻煩,不過應該還是能凍起來 02/14 22:19
7F：→ humwang:這樣比較好幫你找出問題在哪... 02/14 22:20
我的fibroblaat 是 primary culture
當初養的時候,是先把皮膚切成很小塊,貼在dish上面
之後就慢慢長出來了,之後有陸續凍起來,第一代到第五代
剛開始凍的時候我有先凍兩個禮拜再解凍,確定有活
之後就開始一直陸續把細胞凍起來,可是在去年12月的時候
就發現解凍之後不會活,一開始以為是我自己凍的問題
可是後來把-70的全部都解凍了也沒有活,前幾天又去把液態氮裡面的拿來解凍,也都沒有活
所以才想要問一下大家
※ 編輯: winterhsu 來自: 118.161.215.135 (02/14 23:28)
8F：推 zoom8080:後期可以提高FBS濃度來凍細胞 15% 20%試試看 02/15 23:05
9F：推 leoblack:考慮用90%FBS+10%DMSO來凍嘛?! 02/16 00:27
10F：推 crement:自己都是冰primary 沒問題 提高SERUM濃度是一個好方法 02/16 00:39
我們實驗室一直都是用90%FBS+10%DMSO,以前都沒有問題
這次fibroblast才發生這樣的情形
※ 編輯: winterhsu 來自: 203.68.60.155 (02/16 15:10)
※ 編輯: winterhsu 來自: 203.68.60.155 (02/16 16:08)
11F：推 leoblack:你是用漸凍盒?!如果不是~那是怎樣的流程呢?! 02/16 17:07
12F：→ leoblack:不過你凍沒多久的可以活~理論上凍細胞的流程應該沒問題 02/16 17:08
13F：→ winterhsu:把細胞切下來,離心,然後加DMSO,加到冷凍小管,拿去冰 02/16 20:12
14F：→ winterhsu:我大概都是一盤10cm dish 凍3~4管 02/16 20:13
15F：推 caniculer:那DMSO跟DMEM比例多少?另外，你這樣似乎有點稀。 02/17 04:54
16F：→ winterhsu:我們是用FBS取代DMEM 02/17 09:46
17F：推 caniculer:我們是用full medium+DMSO凍的，一盤T75凍一管，解會活 02/18 05:19
18F：→ caniculer:不過如果解凍過久或是離開液態氮太久,解出來存活率很低. 02/18 05:20
19F：推 caniculer:所以你可能是凍太稀吧，看起來只有這裡不同... 02/18 05:26
20F：推 caniculer:還有就是凍細胞的配方也不同，你參考看看囉~ 02/18 05:28
21F：→ winterhsu:恩˙˙那我再試試看好了~ 謝謝大家的意見!! 02/18 06:50