作者winterhsu (winterhsu)
看板Biotech
标题[求救] fibroblast可以冻吗?
时间Sat Feb 14 01:12:55 2009
我之前养firbroblast
曾经有试过先冻个1~2个礼拜再解冻是可以活的
可是最近去解冻fibroblast的时候
全部都没有活
我有的冻在-70有的是冻在液态氮
可是解冻的结果却是都没有活
因为我们实验室之前没有做过fibroblast
所以也不太知道要怎麽用
只是照网路上找到的paper里面的方法来养
想问一下大家... fibroblast可以冻起来吗?!
还是说有什麽条件呢?!
谢谢大家~~~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.161.215.135
1F：推 crement:可以，一般标准冰细胞程序就可以了 02/14 11:04
2F：→ winterhsu:恩...可是我们冻起来的细胞却都死光了,好烦恼哟!! 02/14 15:15
3F：推 conective:你应该给的是你的PROTOCOL 才看得出是哪里出问题 02/14 18:04
4F：推 humwang:你应该说明你的fibroblast是primary culture还是cell line 02/14 22:17
5F：→ humwang:cell line的话,把细胞冻起来已经是标准程序了 02/14 22:18
6F：→ humwang:primary culture的话,也许有点麻烦,不过应该还是能冻起来 02/14 22:19
7F：→ humwang:这样比较好帮你找出问题在哪... 02/14 22:20
我的fibroblaat 是 primary culture
当初养的时候,是先把皮肤切成很小块,贴在dish上面
之後就慢慢长出来了,之後有陆续冻起来,第一代到第五代
刚开始冻的时候我有先冻两个礼拜再解冻,确定有活
之後就开始一直陆续把细胞冻起来,可是在去年12月的时候
就发现解冻之後不会活,一开始以为是我自己冻的问题
可是後来把-70的全部都解冻了也没有活,前几天又去把液态氮里面的拿来解冻,也都没有活
所以才想要问一下大家
※ 编辑: winterhsu 来自: 118.161.215.135 (02/14 23:28)
8F：推 zoom8080:後期可以提高FBS浓度来冻细胞 15% 20%试试看 02/15 23:05
9F：推 leoblack:考虑用90%FBS+10%DMSO来冻嘛?! 02/16 00:27
10F：推 crement:自己都是冰primary 没问题 提高SERUM浓度是一个好方法 02/16 00:39
我们实验室一直都是用90%FBS+10%DMSO,以前都没有问题
这次fibroblast才发生这样的情形
※ 编辑: winterhsu 来自: 203.68.60.155 (02/16 15:10)
※ 编辑: winterhsu 来自: 203.68.60.155 (02/16 16:08)
11F：推 leoblack:你是用渐冻盒?!如果不是~那是怎样的流程呢?! 02/16 17:07
12F：→ leoblack:不过你冻没多久的可以活~理论上冻细胞的流程应该没问题 02/16 17:08
13F：→ winterhsu:把细胞切下来,离心,然後加DMSO,加到冷冻小管,拿去冰 02/16 20:12
14F：→ winterhsu:我大概都是一盘10cm dish 冻3~4管 02/16 20:13
15F：推 caniculer:那DMSO跟DMEM比例多少?另外，你这样似乎有点稀。 02/17 04:54
16F：→ winterhsu:我们是用FBS取代DMEM 02/17 09:46
17F：推 caniculer:我们是用full medium+DMSO冻的，一盘T75冻一管，解会活 02/18 05:19
18F：→ caniculer:不过如果解冻过久或是离开液态氮太久,解出来存活率很低. 02/18 05:20
19F：推 caniculer:所以你可能是冻太稀吧，看起来只有这里不同... 02/18 05:26
20F：推 caniculer:还有就是冻细胞的配方也不同，你参考看看罗~ 02/18 05:28
21F：→ winterhsu:恩˙˙那我再试试看好了~ 谢谢大家的意见!! 02/18 06:50