※ 引述《cattailizu (眼睛一瞇瞇)》之銘言： : 對不起 問這個問題有點蠢 : 因為一直抽同學的血來做實驗 對他很不好意思 : 以下有幾個問題，希望有經驗的人可以幫忙回答一下 : 1.PBMC算是初代細胞嗎? : 之前有去上過細胞培養的課裡 : 老師有說 有些初代細胞可以繼代個4-8代，甚至有的細胞可以到12代 : 不知道有沒有人養過PBMC繼代的 或者是有哪些方法可以讓他增生或是活久一點 : 假設用不含任何營養物質的RPMI-1640養的話 : 大約可以活多久呢? 不行繼代，有些可以活比較久像是MONOCYTE， 或是你養成T cells blast， 看你要的是什麼細胞還有要作什麼實驗。 : 2.計數的問題 : 因為是抽同學的血 一個人大約10-14mL : 可是用細球計數器總覺得不到2*10次方的細胞(/mL) : 這樣的數目是合理的嗎? : 計數的時候 連小粒的細胞也要數嗎 : 我主要是數比較大顆的?這樣做法是不是不對阿 有那種紅血球lysis buffer，沒經驗的話去用一下，以免有錯。 PBMC成人大約1.5-3 Million/ml， 如果太多可能屬錯，太少可能你FICOLL技術有問題。 : 3.看paper裡有人會加10%的FBS在RPMI-1640裡去養(但也有人不加) : 因為ELISA會因為血清的存在或是脂質會影響分析結果 : 所以目前不太趕加FBS 但是分析IL-4跟IFN-r結果都怪怪的 : 會是因為不加FBS把血球們餓死的原因嗎? : 以上希望有經驗的大大給我點建議 : 謝謝你們 ELISA不太怕LIPID，不用太擔心。 但是不加FBS是對的，因為加了FBS以後， 細胞都會被活化，所以CYTOKINE都會變高。 而且每批的FBS早成的影響差很多， 其實有一個簡單的作法。 就是用autolog serum就好了，或是去買人血清。 （是，不要懷疑真的有這種東西） -- 過去的來不及追憶 現在的趕不及接受 得到的不懂得珍惜 失去的無法能忘記 這就是生活嗎？！ --

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