※ 引述《cattailizu (眼睛一眯眯)》之铭言： : 对不起 问这个问题有点蠢 : 因为一直抽同学的血来做实验 对他很不好意思 : 以下有几个问题，希望有经验的人可以帮忙回答一下 : 1.PBMC算是初代细胞吗? : 之前有去上过细胞培养的课里 : 老师有说 有些初代细胞可以继代个4-8代，甚至有的细胞可以到12代 : 不知道有没有人养过PBMC继代的 或者是有哪些方法可以让他增生或是活久一点 : 假设用不含任何营养物质的RPMI-1640养的话 : 大约可以活多久呢? 不行继代，有些可以活比较久像是MONOCYTE， 或是你养成T cells blast， 看你要的是什麽细胞还有要作什麽实验。 : 2.计数的问题 : 因为是抽同学的血 一个人大约10-14mL : 可是用细球计数器总觉得不到2*10次方的细胞(/mL) : 这样的数目是合理的吗? : 计数的时候 连小粒的细胞也要数吗 : 我主要是数比较大颗的?这样做法是不是不对阿 有那种红血球lysis buffer，没经验的话去用一下，以免有错。 PBMC成人大约1.5-3 Million/ml， 如果太多可能属错，太少可能你FICOLL技术有问题。 : 3.看paper里有人会加10%的FBS在RPMI-1640里去养(但也有人不加) : 因为ELISA会因为血清的存在或是脂质会影响分析结果 : 所以目前不太赶加FBS 但是分析IL-4跟IFN-r结果都怪怪的 : 会是因为不加FBS把血球们饿死的原因吗? : 以上希望有经验的大大给我点建议 : 谢谢你们 ELISA不太怕LIPID，不用太担心。 但是不加FBS是对的，因为加了FBS以後， 细胞都会被活化，所以CYTOKINE都会变高。 而且每批的FBS早成的影响差很多， 其实有一个简单的作法。 就是用autolog serum就好了，或是去买人血清。 （是，不要怀疑真的有这种东西） -- 过去的来不及追忆 现在的赶不及接受 得到的不懂得珍惜 失去的无法能忘记 这就是生活吗？！ --

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