作者xson (無心交代)
看板Biotech
標題Western blot的Marker會被抗體辨識？
時間Sat Feb 7 21:09:09 2009
最近跑Western 使用mouse anti GFP做為一抗，室溫O/N(1:20000)
anti mouse HRP conjugate做為二抗(1:5000)，室溫一小時
壓片顯影一個半小時後，發現Marker會出現band，此外wild type negative control
在目標位置以外也會出現訊號，比實驗組預期位置的訊號還要明顯
請問這些不預期出現的訊號是因為我的二抗下太多嗎
或是blocking不夠？洗得不夠乾淨？(實驗時皆使用TSW進行blocking，稀釋抗體，wash)
另外，若要壓片久一些，該特別注意先前的哪個步驟？
謝謝各位指教！！
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◆ From: 140.113.199.106
1F：推 kirby0415:在室溫一抗通常2~3hrs即可,且室溫probe background會高 02/07 22:09
2F：→ kirby0415:我通常一抗都4度O/N或室溫hrs耶!建議做一個mouse IgG 02/07 22:11
3F：→ kirby0415:為一抗的control,這樣比較可以確定你要看的band 02/07 22:11
4F：→ kirby0415:我第二行漏打了...囧rz~是室溫2hrs 02/07 22:12
5F：推 chvkimo:我一抗都室溫1 hr而已,因為我一抗有reuse 02/07 22:27
6F：→ xson:謝謝兩位指教:)因為protein量少，所以才會以一抗O/N來試，我 02/08 15:40
7F：→ xson:會再試試看一抗的條件，thx~~ 02/08 15:42