作者xson (无心交代)
看板Biotech
标题Western blot的Marker会被抗体辨识？
时间Sat Feb 7 21:09:09 2009
最近跑Western 使用mouse anti GFP做为一抗，室温O/N(1:20000)
anti mouse HRP conjugate做为二抗(1:5000)，室温一小时
压片显影一个半小时後，发现Marker会出现band，此外wild type negative control
在目标位置以外也会出现讯号，比实验组预期位置的讯号还要明显
请问这些不预期出现的讯号是因为我的二抗下太多吗
或是blocking不够？洗得不够乾净？(实验时皆使用TSW进行blocking，稀释抗体，wash)
另外，若要压片久一些，该特别注意先前的哪个步骤？
谢谢各位指教！！
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◆ From: 140.113.199.106
1F：推 kirby0415:在室温一抗通常2~3hrs即可,且室温probe background会高 02/07 22:09
2F：→ kirby0415:我通常一抗都4度O/N或室温hrs耶!建议做一个mouse IgG 02/07 22:11
3F：→ kirby0415:为一抗的control,这样比较可以确定你要看的band 02/07 22:11
4F：→ kirby0415:我第二行漏打了...囧rz~是室温2hrs 02/07 22:12
5F：推 chvkimo:我一抗都室温1 hr而已,因为我一抗有reuse 02/07 22:27
6F：→ xson:谢谢两位指教:)因为protein量少，所以才会以一抗O/N来试，我 02/08 15:40
7F：→ xson:会再试试看一抗的条件，thx~~ 02/08 15:42