※ 引述《[email protected] (我一個人住)》之銘言： > 發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 > 以方便板友幫您追蹤問題 > ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- > 1. 秤重 0.1 g (頂多增加到 1.5 g). 放入Tube中. 再放入液態氮中 > 2. 自液態氮中取出 Tube，磨碎後先加300 μl TRIZOL vortex, > 再加700 μl TRIZOL > # 我也用過研缽磨成粉後，把粉末取出來秤重，再加TRIZOL， > 但濃度還是一樣低，不知道是不是動作不夠快 > 3. RT／15 min, 12,000 x 15 min x 4℃ > 4. 加 200 μl Chloroform. shake 15-30 s, 12,000 g x 15 min x 4℃ > 5. 加 0.5 ml isopropanel, RT／10 min > 6. 12,000 g x 10 min x 4℃ 留pellet. > 7. 加 1 mL 75% EtOH Wash. (可vortex讓pellet漂浮) > 8. 7,500 g x 5 min x 4℃, 抽掉 EtOH > 9. Air – Dry／10 min > 10. 加 20 μl ddH2O (50℃), 回溶 20 min, 測 OD值 > 11. 取 10 μg Total RNA (最少) + 10X Buffer (TURBO) + DNase 1 μl + ddH2O， > Total Volume 25 μl, 37℃ / 30 min > 12. 加 2.5 μl inactivation buffer (TURBO), RT／2 min > 13. 10,000 g x 2 min x 4℃, 取上層到 new Tube 中, 測 OD值 > 14. 合成 cDNA (因為濃度太低，所以沒有往下做) > 感謝大家耐心看完，如果有任何建議，麻煩也寫在版上或寫信給我 > 這個步驟停了好久，有點糟糕 > 也祝大家 > 新年快樂 你要注意 你處理的sample是否是RNase-rich tissue當你研磨過成中 sample 可能會液化當中被釋出的RNase 將會吃掉你的RNA -- ◢◣ ︵︵ █▔◣ █▔█ █▔▔ █▔█ █▆▉ █ █▔█ █◣█ █▔● ◢◤█◣◢◣ ︵︵ █ █ █▁◤ █▁▁ █▁█ ▉▉▉ █ █▁█ █◥█ █ █ 夢之大地 逼逼ㄟ四 █▁◤ █ █ █▁▁ █ █ ▉▉▉ █▁ █ █ █ █ █▁◤ ※ Origin: <bbs.ccns.ncku.edu.tw> ◆ From: 140.109.55.243