※ 引述《[email protected] (我一个人住)》之铭言： > 发问时请注意，若是要问实验相关的问题，请将实验的步骤、所用的条件大致列出 > 以方便板友帮您追踪问题 > ----请将上列注意事项以 ctrl + k 删除後开始编辑文章---- > 1. 秤重 0.1 g (顶多增加到 1.5 g). 放入Tube中. 再放入液态氮中 > 2. 自液态氮中取出 Tube，磨碎後先加300 μl TRIZOL vortex, > 再加700 μl TRIZOL > # 我也用过研钵磨成粉後，把粉末取出来秤重，再加TRIZOL， > 但浓度还是一样低，不知道是不是动作不够快 > 3. RT／15 min, 12,000 x 15 min x 4℃ > 4. 加 200 μl Chloroform. shake 15-30 s, 12,000 g x 15 min x 4℃ > 5. 加 0.5 ml isopropanel, RT／10 min > 6. 12,000 g x 10 min x 4℃ 留pellet. > 7. 加 1 mL 75% EtOH Wash. (可vortex让pellet漂浮) > 8. 7,500 g x 5 min x 4℃, 抽掉 EtOH > 9. Air – Dry／10 min > 10. 加 20 μl ddH2O (50℃), 回溶 20 min, 测 OD值 > 11. 取 10 μg Total RNA (最少) + 10X Buffer (TURBO) + DNase 1 μl + ddH2O， > Total Volume 25 μl, 37℃ / 30 min > 12. 加 2.5 μl inactivation buffer (TURBO), RT／2 min > 13. 10,000 g x 2 min x 4℃, 取上层到 new Tube 中, 测 OD值 > 14. 合成 cDNA (因为浓度太低，所以没有往下做) > 感谢大家耐心看完，如果有任何建议，麻烦也写在版上或写信给我 > 这个步骤停了好久，有点糟糕 > 也祝大家 > 新年快乐 你要注意 你处理的sample是否是RNase-rich tissue当你研磨过成中 sample 可能会液化当中被释出的RNase 将会吃掉你的RNA -- ◢◣ ︵︵ █▔◣ █▔█ █▔▔ █▔█ █▆▉ █ █▔█ █◣█ █▔● ◢◤█◣◢◣ ︵︵ █ █ █▁◤ █▁▁ █▁█ ▉▉▉ █ █▁█ █◥█ █ █ 梦之大地 逼逼ㄟ四 █▁◤ █ █ █▁▁ █ █ ▉▉▉ █▁ █ █ █ █ █▁◤ ※ Origin: <bbs.ccns.ncku.edu.tw> ◆ From: 140.109.55.243