作者gugin (陳抽筋)
看板Biotech
標題[求救] 請問有人養過 colo 205 嗎 ?
時間Mon Jan 26 16:08:36 2009
因為最近開始接觸以細胞篩選藥物的實驗 是個超級新手 有幾個問題想請教大家
1. cell line : colo 205 , medium : RPMI + 5% FBS
我發現若在 T75 flask 內 passage 1*10^6 細胞，約在兩天後細胞的 morphology
會開始產生變化， 細胞會從圓形開始出現 “ 長角” 的樣子，也會變的細長而
非圓形 ; 另外一些細胞一樣呈現圓形，但體積變大，細胞膜完整，但整個細胞內
看起來都黑黑的，此外 passage 兩天後也會出現一些小亮點 (不知是否為
apoptotic body)，請問這些出現這些 morphology 改變的原因是什麼？是否
是我的細胞已經太老 ? 又，用這樣條件下的細胞來進行藥物篩選所得到的得結
果可信嗎 ?
2. 之前實驗是將T75 flask內的細胞取下，seeding 不同細胞數目在96-well plate
內，在24，72 和 96小時後測 cell viability ;
問題是 : 72 和 96小時的cell viability 相較於24小時，幾乎沒有增加
(有確認過細胞數目在合理範圍內) ；
而後第三次實驗在 72 小時 和 96 小時又可以明顯看出 cell viability大幅
提升，但我實在想不出來是做了什麼改變造成兩次實驗結果大不相同，想到的
是第三次實驗時，細胞是 passage 後兩天取下，而先前是 passage 後三天才
取下，有可能是先前細胞養太老，導致在 seeding後，細胞已不在 log phase
的狀態了嗎？
3. 為了要確保 seeding 時細胞處在 log phase ，我想先以 T75 flask 培養細
胞測得其生長曲線，而後在 log phase 時將細胞取下，seeding 不同細胞數
目在96-well plate內，在24，72 和 96小時後測 cell viability，以求得最
佳篩選藥物的細胞數目，不知道這樣的實驗設計是否可行 ? 有無邏輯上的瑕疵
？
因為是新手, 問題有點多, 在此先謝謝大家耐心看完
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 218.167.185.120
1F：推 jabari:先到ATCC查一下cell line資料, 找附近實驗室有養這株的學長 01/28 23:50
2F：→ jabari:持續培養對照組 直到你對他生長速速率 形態都能掌握 01/28 23:53
3F：→ gugin:因為認識的人都沒養過這株細胞 @@ 也看過 ATCC 的資料 01/29 00:22
4F：→ gugin:發現passage兩天後 有些細胞的morphology就和ATCC上的不一樣 01/29 00:24
5F：→ gugin:除了做生長曲線外 我該如何解決morphology 變形的問題 01/29 00:28
6F：→ gugin:請大家指點我迷津 感激不盡 ^_^ 01/29 00:29
7F：推 malakaki:我養過...但是我的沒有變形 01/29 14:20
8F：→ gugin:那請問你是用 trypsine 處理還是用刮的呢? 謝謝 01/29 14:24
9F：→ gugin:更正 trypsin 01/29 14:25
10F：推 tsubasawolfy:microplasma污染0.0? 01/30 09:48