作者gugin (陈抽筋)
看板Biotech
标题[求救] 请问有人养过 colo 205 吗 ?
时间Mon Jan 26 16:08:36 2009
因为最近开始接触以细胞筛选药物的实验 是个超级新手 有几个问题想请教大家
1. cell line : colo 205 , medium : RPMI + 5% FBS
我发现若在 T75 flask 内 passage 1*10^6 细胞，约在两天後细胞的 morphology
会开始产生变化， 细胞会从圆形开始出现 “ 长角” 的样子，也会变的细长而
非圆形 ; 另外一些细胞一样呈现圆形，但体积变大，细胞膜完整，但整个细胞内
看起来都黑黑的，此外 passage 两天後也会出现一些小亮点 (不知是否为
apoptotic body)，请问这些出现这些 morphology 改变的原因是什麽？是否
是我的细胞已经太老 ? 又，用这样条件下的细胞来进行药物筛选所得到的得结
果可信吗 ?
2. 之前实验是将T75 flask内的细胞取下，seeding 不同细胞数目在96-well plate
内，在24，72 和 96小时後测 cell viability ;
问题是 : 72 和 96小时的cell viability 相较於24小时，几乎没有增加
(有确认过细胞数目在合理范围内) ；
而後第三次实验在 72 小时 和 96 小时又可以明显看出 cell viability大幅
提升，但我实在想不出来是做了什麽改变造成两次实验结果大不相同，想到的
是第三次实验时，细胞是 passage 後两天取下，而先前是 passage 後三天才
取下，有可能是先前细胞养太老，导致在 seeding後，细胞已不在 log phase
的状态了吗？
3. 为了要确保 seeding 时细胞处在 log phase ，我想先以 T75 flask 培养细
胞测得其生长曲线，而後在 log phase 时将细胞取下，seeding 不同细胞数
目在96-well plate内，在24，72 和 96小时後测 cell viability，以求得最
佳筛选药物的细胞数目，不知道这样的实验设计是否可行 ? 有无逻辑上的瑕疵
？
因为是新手, 问题有点多, 在此先谢谢大家耐心看完
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◆ From: 218.167.185.120
1F：推 jabari:先到ATCC查一下cell line资料, 找附近实验室有养这株的学长 01/28 23:50
2F：→ jabari:持续培养对照组 直到你对他生长速速率 形态都能掌握 01/28 23:53
3F：→ gugin:因为认识的人都没养过这株细胞 @@ 也看过 ATCC 的资料 01/29 00:22
4F：→ gugin:发现passage两天後 有些细胞的morphology就和ATCC上的不一样 01/29 00:24
5F：→ gugin:除了做生长曲线外 我该如何解决morphology 变形的问题 01/29 00:28
6F：→ gugin:请大家指点我迷津 感激不尽 ^_^ 01/29 00:29
7F：推 malakaki:我养过...但是我的没有变形 01/29 14:20
8F：→ gugin:那请问你是用 trypsine 处理还是用刮的呢? 谢谢 01/29 14:24
9F：→ gugin:更正 trypsin 01/29 14:25
10F：推 tsubasawolfy:microplasma污染0.0? 01/30 09:48