作者tessietsao (戰勝自己)
看板Biotech
標題[求救] 抽RNA時 260/280 高於2
時間Thu Jan 15 23:22:51 2009
我在抽RNA的時候
260/280 常常都在2.1上下 不會低於2
260/230 也在1.3~1.5中間跑
想知道該怎麼操作才能把有機溶劑抽乾淨
我把步驟po上來
不知道哪裡可以改進
trizol 0.5ml--->5 min 靜置
抽到enppendoft
加氯仿 0.1ml--->vortex 15sec 3min靜置
離心 12000rpm 4度 15min
抽上清液0.2ml 至新的enpendoft
加isp 0.25ml 上下搖均勻
靜置10min
離心 12000rpm 4度 10min
pellet出現
倒掉液體 用幫浦把管壁的液體抽乾
加75%酒精 0.75ml wash
不過此時我並沒有把pellet打下來
還黏在底部(我最有疑問的地方)
離心 12000rpm 4度 5min
倒掉酒精 用幫浦抽到不能再抽
airdry(抽乾時發現pellet成透明狀)5min
回溶60度 10min
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謝謝大家
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.67.249
1F：推 sunnyting:請問你是抽植物還是動物? sample用量是多少? 01/15 23:37
2F：→ tessietsao:動物的 我收6well 一格加0.5ml trizol 01/16 00:09
3F：推 sunnyting:我是做植物的 可是很好奇你為啥會覺得有機溶液抽不乾淨? 01/16 00:28
4F：→ sunnyting:是因為260/280 太高的話 降低sample量提高trizol量可試 01/16 00:29
5F：→ tessietsao:老師說 260/280高於2是isp沒抽乾淨... 01/16 00:51
6F：推 sunnyting:囧.... ipa會揮發吧?..............................?? 01/16 01:02
7F：→ sunnyting:喔我的ipa=你的isp... 01/16 01:03
8F：推 pupuwu:酒精用幫浦抽乾後 再spi n down~ 再吸一次 01/16 10:04
9F：推 soom:最後那次酒精我有用過99%酒精來洗 然後我會換新的管子去裝 01/16 16:22
10F：推 GoPacers:加入氯仿後抽上清液太靠近分層的部份就放棄吧! 01/17 11:27
11F：→ GoPacers:75%酒精把pellet打下來搖一搖是ok的 01/17 11:28
12F：→ GoPacers:airdry之前可以先倒蓋在衛生紙上吸乾 縮短乾燥時間 01/17 11:29
13F：→ GoPacers:大概airdry1~3分鐘即可 所有步驟越快越好 01/17 11:31
14F：→ GoPacers:另外就是回溶的溶液您是用啥呢?這也很重要 01/17 11:32
15F：→ tessietsao:用水溶的~有甚麼不同嗎／ 01/17 18:25
16F：→ GoPacers:用DEPC水吧! 普通滅菌水中仍然會有RNase 01/17 19:54
17F：推 cutebetty:印象中RNA的260/280最好是介於1.9-2.1的樣子 01/21 10:52