作者tessietsao (战胜自己)
看板Biotech
标题[求救] 抽RNA时 260/280 高於2
时间Thu Jan 15 23:22:51 2009
我在抽RNA的时候
260/280 常常都在2.1上下 不会低於2
260/230 也在1.3~1.5中间跑
想知道该怎麽操作才能把有机溶剂抽乾净
我把步骤po上来
不知道哪里可以改进
trizol 0.5ml--->5 min 静置
抽到enppendoft
加氯仿 0.1ml--->vortex 15sec 3min静置
离心 12000rpm 4度 15min
抽上清液0.2ml 至新的enpendoft
加isp 0.25ml 上下摇均匀
静置10min
离心 12000rpm 4度 10min
pellet出现
倒掉液体 用帮浦把管壁的液体抽乾
加75%酒精 0.75ml wash
不过此时我并没有把pellet打下来
还黏在底部(我最有疑问的地方)
离心 12000rpm 4度 5min
倒掉酒精 用帮浦抽到不能再抽
airdry(抽乾时发现pellet成透明状)5min
回溶60度 10min
___________________
谢谢大家
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.67.249
1F：推 sunnyting:请问你是抽植物还是动物? sample用量是多少? 01/15 23:37
2F：→ tessietsao:动物的 我收6well 一格加0.5ml trizol 01/16 00:09
3F：推 sunnyting:我是做植物的 可是很好奇你为啥会觉得有机溶液抽不乾净? 01/16 00:28
4F：→ sunnyting:是因为260/280 太高的话 降低sample量提高trizol量可试 01/16 00:29
5F：→ tessietsao:老师说 260/280高於2是isp没抽乾净... 01/16 00:51
6F：推 sunnyting:囧.... ipa会挥发吧?..............................?? 01/16 01:02
7F：→ sunnyting:喔我的ipa=你的isp... 01/16 01:03
8F：推 pupuwu:酒精用帮浦抽乾後 再spi n down~ 再吸一次 01/16 10:04
9F：推 soom:最後那次酒精我有用过99%酒精来洗 然後我会换新的管子去装 01/16 16:22
10F：推 GoPacers:加入氯仿後抽上清液太靠近分层的部份就放弃吧! 01/17 11:27
11F：→ GoPacers:75%酒精把pellet打下来摇一摇是ok的 01/17 11:28
12F：→ GoPacers:airdry之前可以先倒盖在卫生纸上吸乾 缩短乾燥时间 01/17 11:29
13F：→ GoPacers:大概airdry1~3分钟即可 所有步骤越快越好 01/17 11:31
14F：→ GoPacers:另外就是回溶的溶液您是用啥呢?这也很重要 01/17 11:32
15F：→ tessietsao:用水溶的~有甚麽不同吗／ 01/17 18:25
16F：→ GoPacers:用DEPC水吧! 普通灭菌水中仍然会有RNase 01/17 19:54
17F：推 cutebetty:印象中RNA的260/280最好是介於1.9-2.1的样子 01/21 10:52