作者boblu (六百)
看板Biotech
標題Re: [求救] 關於protein purification
時間Tue Jan 13 09:15:33 2009
生看站死掉了 用 PTT 回
原 po 的狀況真的很微妙
denature form, 所以不太可能是 his-tag 沒有露出來
有用其他的 his-tagged protein 跑過同樣的流程發現可以
表示 protocol 大致沒有問題
我想再問一下 原 po 說有用 western 看過 lysate, flow through 跟 elute
用的是什麼抗體？是對你想純化的 protein 專一的抗體 還是 anti his-tag 的?
因為我現在想到的的最後一個可能是
雖然 construct 的序列正確
但是 his-tag 或甚至是部分 C 端可能根本沒有被 translate 出來
這樣就有可能你 PAGE 看起來好像正常
用針對該 protein 專一的抗體染也可以染
但是永遠純化不出來
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 122.116.69.32
1F：推 theessential:用的是抗目標蛋白N端thioredoxin的抗體,因為蛋白是實 01/14 06:22
2F：→ theessential:驗室自己做的抗體,沒有專一性的抗體可壓~ 01/14 06:22
3F：→ theessential:我會再壓His-tag確定的,謝謝你的建議^^" 01/14 06:23
4F：→ theessential:另外請問一下,如果真的是translation的問題的話, 01/14 06:24
5F：→ theessential:有辦法解決嗎? 謝謝你~ 01/14 06:24