作者boblu (六百)
看板Biotech
标题Re: [求救] 关於protein purification
时间Tue Jan 13 09:15:33 2009
生看站死掉了 用 PTT 回
原 po 的状况真的很微妙
denature form, 所以不太可能是 his-tag 没有露出来
有用其他的 his-tagged protein 跑过同样的流程发现可以
表示 protocol 大致没有问题
我想再问一下 原 po 说有用 western 看过 lysate, flow through 跟 elute
用的是什麽抗体？是对你想纯化的 protein 专一的抗体 还是 anti his-tag 的?
因为我现在想到的的最後一个可能是
虽然 construct 的序列正确
但是 his-tag 或甚至是部分 C 端可能根本没有被 translate 出来
这样就有可能你 PAGE 看起来好像正常
用针对该 protein 专一的抗体染也可以染
但是永远纯化不出来
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◆ From: 122.116.69.32
1F：推 theessential:用的是抗目标蛋白N端thioredoxin的抗体,因为蛋白是实 01/14 06:22
2F：→ theessential:验室自己做的抗体,没有专一性的抗体可压~ 01/14 06:22
3F：→ theessential:我会再压His-tag确定的,谢谢你的建议^^" 01/14 06:23
4F：→ theessential:另外请问一下,如果真的是translation的问题的话, 01/14 06:24
5F：→ theessential:有办法解决吗? 谢谢你~ 01/14 06:24