作者lazyanna (懶..)
看板Biotech
標題[求救] western blot電泳時電流不穩定的問題
時間Wed Dec 24 19:26:48 2008
我們跑電泳所設定的電壓是上膠50~60V.下膠100~120V
但是最近在跑電泳時發現電源供應器上的電流值顯示到60~100多的mA
同學有反應似乎是不正常的反應
GOOGLE一下發現~電流太大的話會造成蛋白產生"電解"
因為以前在跑都只有20~30mA的電流值
並且壓片的結果會糊糊的(以ECL呈色)
同學覺得是配膠的Tris buffer(pH=8.8)有問題
但重配了2次結果仍然是電流太高
Running buffer也已重新配置
想請問板上高手們.有沒有解決的方法喔
thx!!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.127.19.140
1F：推 bluecsky:這應該是SDS-PAGE..你標題我還以為是WB transfer的時候.. 12/24 21:33
2F：→ bluecsky:你的power會不會設定有問題?一般60v不可能到60mA.. 12/24 21:34
3F：→ bluecsky:buffer都重配而且以前沒這問題的話 或許該看看power 12/24 21:35
4F：推 leoblack:可以考慮定電流啊~我個人跑都是定電流跑~ 12/24 21:39
5F：推 kirby0415:短路嗎?你用哪牌的跑膠器?你只跑一片嗎?背面那面沒膠的 12/24 22:08
6F：→ kirby0415:底下電線是不是有浸到running buffer?有的話會短路喔! 12/24 22:09
7F：→ kirby0415:背面的電線不要浸到buffer 12/24 22:09
8F：→ kirby0415:壓片糊糊的...你底片有整個"用力"壓在membrane上嗎? 12/24 22:11
9F：→ kirby0415:我之前就只有"蓋"上去 就糊糊的 XD 12/24 22:11
10F：→ lazyanna:K大您好~我想請教您所謂的短路是跑膠台上的電線短路嗎? 12/26 00:24
11F：→ lazyanna:b大您好~Power supply是GE的~兩台不同台跑的結果都這樣耶 12/26 00:26
12F：→ lazyanna:L大~謝謝您的建議喔 12/26 00:31
13F：推 kirby0415:是阿是阿~~ 12/26 21:08
14F：推 mamacaca:換一組跑膠的的機器試試看 但是配方材料還是先用原來的 12/27 01:00
15F：→ mamacaca:或是去別家換個系統試試看 基本上定電流看起來沒問題 12/27 01:01
16F：→ mamacaca:Tris 和Tris-HCL不一樣喔 Tris buffer的PH值要很注意 12/27 01:03
17F：→ lazyanna:SORRY^^"是Tris-Hcl,但是我已經有把所有buffer pH重測囉 12/28 10:20