作者lazyanna (懒..)
看板Biotech
标题[求救] western blot电泳时电流不稳定的问题
时间Wed Dec 24 19:26:48 2008
我们跑电泳所设定的电压是上胶50~60V.下胶100~120V
但是最近在跑电泳时发现电源供应器上的电流值显示到60~100多的mA
同学有反应似乎是不正常的反应
GOOGLE一下发现~电流太大的话会造成蛋白产生"电解"
因为以前在跑都只有20~30mA的电流值
并且压片的结果会糊糊的(以ECL呈色)
同学觉得是配胶的Tris buffer(pH=8.8)有问题
但重配了2次结果仍然是电流太高
Running buffer也已重新配置
想请问板上高手们.有没有解决的方法喔
thx!!
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◆ From: 140.127.19.140
1F：推 bluecsky:这应该是SDS-PAGE..你标题我还以为是WB transfer的时候.. 12/24 21:33
2F：→ bluecsky:你的power会不会设定有问题?一般60v不可能到60mA.. 12/24 21:34
3F：→ bluecsky:buffer都重配而且以前没这问题的话 或许该看看power 12/24 21:35
4F：推 leoblack:可以考虑定电流啊~我个人跑都是定电流跑~ 12/24 21:39
5F：推 kirby0415:短路吗?你用哪牌的跑胶器?你只跑一片吗?背面那面没胶的 12/24 22:08
6F：→ kirby0415:底下电线是不是有浸到running buffer?有的话会短路喔! 12/24 22:09
7F：→ kirby0415:背面的电线不要浸到buffer 12/24 22:09
8F：→ kirby0415:压片糊糊的...你底片有整个"用力"压在membrane上吗? 12/24 22:11
9F：→ kirby0415:我之前就只有"盖"上去 就糊糊的 XD 12/24 22:11
10F：→ lazyanna:K大您好~我想请教您所谓的短路是跑胶台上的电线短路吗? 12/26 00:24
11F：→ lazyanna:b大您好~Power supply是GE的~两台不同台跑的结果都这样耶 12/26 00:26
12F：→ lazyanna:L大~谢谢您的建议喔 12/26 00:31
13F：推 kirby0415:是阿是阿~~ 12/26 21:08
14F：推 mamacaca:换一组跑胶的的机器试试看 但是配方材料还是先用原来的 12/27 01:00
15F：→ mamacaca:或是去别家换个系统试试看 基本上定电流看起来没问题 12/27 01:01
16F：→ mamacaca:Tris 和Tris-HCL不一样喔 Tris buffer的PH值要很注意 12/27 01:03
17F：→ lazyanna:SORRY^^"是Tris-Hcl,但是我已经有把所有buffer pH重测罗 12/28 10:20